24小时热门版块排行榜    

查看: 2368  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

物质鉴定

金虫 (正式写手)

[求助] 相对定量PCR求助 已有2人参与

本人刚接触分子,想请教各位牛人有关实时定量荧光PCR的一些问题。我要做不同土壤位点某类微生物的相对量的多少,所以想做相对定量PCR,初步的实验思路如下:
1提取各位点土壤中的DNA。
2实时荧光PCR。将某位点的DNA连续稀释7个10倍梯度,设定DNA的终拷贝数分别为100-10-7n/ul,用来做相对定量的标曲
3.已知这类微生物的特征基因A,用A基因扩增引物扩增上步中不同稀释倍数DNA中的A基因及其他位点样品的A基因。设定阈值,通过Ct值计算出各位点中A基因模板的相对拷贝数,从而得出各位点某类微生物的相对多少
不知道我的想法是不是对的?请各位指教,我会虚心接受大家的意见。另外我看好多有要管家基因,我这里需要管家基因嘛?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 物质鉴定 at 2011-10-04 12:57:15:
作微生物的话用什么看家基因好列,能给点意见吗?谢谢

是不是啊,我还打算做呢 O(∩_∩)O~
8楼2011-10-04 23:12:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

物质鉴定(金币+5): 2011-10-04 13:03:55
楼主想用的是什么方法,相对定量还是绝对定量,
相对定量的话看家基因是一定要的,楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度,即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因,需要做标准曲线,通过标准曲线来定量,但是标准品难以获得,自己做的不一定符合要求,所以一般不采用这种方法。
一点浅见,希望对你有用。
风雪夜归人
3楼2011-10-02 19:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你做微生物含量的多少,完全可以用DGGE啊,RT-PCR主要是看基因表达量的差异的,例如不同处理条件下,二者的表达量差异
4楼2011-10-03 10:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

物质鉴定

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-10-02 19:26:54:
楼主想用的是什么方法,相对定量还是绝对定量,
相对定量的话看家基因是一定要的,楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度,即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因,需要做标准曲线,通过标准曲线来定 ...

作微生物的话用什么看家基因好列,能给点意见吗?谢谢
5楼2011-10-04 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
信息提示
请填处理意见