应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 相对定量PCR求助
171/2返回列表12下一页
查看: 2734  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

物质鉴定

金虫 (正式写手)

[求助] 相对定量PCR求助 已有2人参与

本人刚接触分子，想请教各位牛人有关实时定量荧光PCR的一些问题。我要做不同土壤位点某类微生物的相对量的多少，所以想做相对定量PCR，初步的实验思路如下：
1提取各位点土壤中的DNA。
2实时荧光PCR。将某位点的DNA连续稀释7个10倍梯度，设定DNA的终拷贝数分别为100-10-7n/ul，用来做相对定量的标曲
3.已知这类微生物的特征基因A,用A基因扩增引物扩增上步中不同稀释倍数DNA中的A基因及其他位点样品的A基因。设定阈值，通过Ct值计算出各位点中A基因模板的相对拷贝数，从而得出各位点某类微生物的相对多少
不知道我的想法是不是对的？请各位指教，我会虚心接受大家的意见。另外我看好多有要管家基因，我这里需要管家基因嘛？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-01 13:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于清
2楼2011-10-01 15:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

物质鉴定(金币+5): 2011-10-04 13:03:55
楼主想用的是什么方法，相对定量还是绝对定量，
相对定量的话看家基因是一定要的，楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度，即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因，需要做标准曲线，通过标准曲线来定量，但是标准品难以获得，自己做的不一定符合要求，所以一般不采用这种方法。
一点浅见，希望对你有用。
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
3楼2011-10-02 19:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你做微生物含量的多少，完全可以用DGGE啊，RT-PCR主要是看基因表达量的差异的，例如不同处理条件下，二者的表达量差异
赞一下 回复此楼
4楼2011-10-03 10:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

物质鉴定

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-10-02 19:26:54:
楼主想用的是什么方法，相对定量还是绝对定量，
相对定量的话看家基因是一定要的，楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度，即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因，需要做标准曲线，通过标准曲线来定 ...

作微生物的话用什么看家基因好列，能给点意见吗？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2011-10-04 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

物质鉴定

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinongfish at 2011-10-03 10:29:36:
你做微生物含量的多少，完全可以用DGGE啊，RT-PCR主要是看基因表达量的差异的，例如不同处理条件下，二者的表达量差异

老板说DGGE已经过时了，所以不要我做，呵呵
赞一下 回复此楼
6楼2011-10-04 13:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)
你是想知道那种微生物的多少啊，细菌？真菌？
是要土壤中总的微生物量的多少，还是土壤中某种微生物占的比比例的多少？
赞一下 回复此楼
7楼2011-10-04 14:09:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 物质鉴定 at 2011-10-04 12:57:15:
作微生物的话用什么看家基因好列，能给点意见吗？谢谢

是不是啊，我还打算做呢 O(∩_∩)O~
赞一下 回复此楼
8楼2011-10-04 23:12:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

默默的等待

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我感觉你用探针做是不是好一点啊 自己觉得，不知道对不对
赞一下 回复此楼
9楼2011-10-05 21:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiajiao1012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2143191楼: Originally posted by 物质鉴定 at 2011-10-04 12:57:15
作微生物的话用什么看家基因好列，能给点意见吗？谢谢...

你现在应该已经确定方法做了吧。我也想请教一下呢，我是做混合菌种某种微生物的计数，想请你分享下经验，不胜感激~~
赞一下 回复此楼
just be happy
10楼2012-11-01 09:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 物质鉴定 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +4 简单化xn 2026-08-22 8/400 2026-08-23 07:20 by ilovexiaobin
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭