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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 相对定量PCR求助
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宁宁0320

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，在小木虫走了很久，才发现你的问题跟一直困扰我的问题相似啊，你在帖子中的问题解决了吗？你是用相对定量做的土壤中的菌的相对量吗？我想做虫子不同发育龄期某种菌的相对差异，也想做相对定量，都说绝对定量不容易所以没敢尝试。求亲得援助！！！不甚感激！！！
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共生菌寻求实验盟友，互帮互助，实验进步
11楼2014-05-23 09:59:15
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宁宁0320

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-10-02 19:26:54
楼主想用的是什么方法，相对定量还是绝对定量，
相对定量的话看家基因是一定要的，楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度，即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因，需要做标准曲线，通过标准曲线来定量 ...

你好，在这个帖子看到你的解答，受益匪浅，我也想请教你一些问题，我想做虫子不同发育龄期某种菌的相对差异，也想做相对定量，可以像版主求助帖那样做吗？主要是我其实模板浓度没法控制。内参，引物都有了，求亲得援助！！！不甚感激！！！
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共生菌寻求实验盟友，互帮互助，实验进步
12楼2014-05-23 10:02:45
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 宁宁0320 at 2014-05-23 10:02:45
你好，在这个帖子看到你的解答，受益匪浅，我也想请教你一些问题，我想做虫子不同发育龄期某种菌的相对差异，也想做相对定量，可以像版主求助帖那样做吗？主要是我其实模板浓度没法控制。内参，引物都有了，求亲得 ...

那就用相对定量的方法做定量PCR吧
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风雪夜归人
13楼2014-05-23 15:18:01
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宁宁0320

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wqj1988926 at 2014-05-23 15:18:01
那就用相对定量的方法做定量PCR吧...

我想问的是，版主帖子中的实验设计可以不？直接把DNA稀释做相对标曲？我虫子的其实模板浓度不好控制，虫子很小，提取RNA也不容易。
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共生菌寻求实验盟友，互帮互助，实验进步
14楼2014-05-25 00:27:48
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 宁宁0320 at 2014-05-25 00:27:48
我想问的是，版主帖子中的实验设计可以不？直接把DNA稀释做相对标曲？我虫子的其实模板浓度不好控制，虫子很小，提取RNA也不容易。...

应该可以的，你可试一下的如果你目前没有更好的方法的话。但要保证提取的RNA的质量
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风雪夜归人
15楼2014-05-27 10:01:06
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宁宁0320

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by wqj1988926 at 2014-05-27 10:01:06
应该可以的，你可试一下的如果你目前没有更好的方法的话。但要保证提取的RNA的质量...

多谢你了，我试试把
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16楼2014-05-27 10:14:31
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grase

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

用定量PCR的绝对定量方法完全可以满足你的结果要求。
每一步都定量，做标准品，标准曲线即可相互换算。
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17楼2014-05-27 10:44:15
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