24小时热门版块排行榜    

查看: 5934  |  回复: 12

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-31 13:32:47
引用回帖:
10楼: Originally posted by 杜越欧 at 2012-03-31 12:34:06:
循环数我一直用的都是40,减少的幅度大概多少呢,这样就能使目的基因和管家基因的ct值相近么?

出现你这种现象的原因要么是你引物没设计好,要么是你的基因在你的细胞系中表达丰度低。引物问题好解决,但我觉得更可能是你的基因在你的细胞中表达丰度低。你增加你的模板量,同时将循环数降低到30.也建议你做下二次PCR找找原因,即做普通PCR,然后以第一次PCR的产物为模板再做一次PCR。这样通过两次PCR的跑胶情况能验证是不是你引物的问题,或者是基因表达丰度的问题,祝楼主实验顺利
11楼2012-03-31 12:44:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-03-28 18:25:49
首先 模板量必须加等量的,这样内参才能对目的基因相对定量啊。其次 正常的Ct值范围为18-30之间,最好为23左右。一般一个20ul的反应体系里模板量最大为1ug。
其次,不知楼主的Ct值是太高还是太低,若是太高,那么说 ...

你好,我最近打算做QpCR,模板是cDNA,当时反转录的时候是根据promega
的M-MLV逆转录酶说明书进行的,使用的RNA量是2ug。这样子我觉得出的cDNA浓度也是蛮大的,如果我接着做QPCR的话,大概需要稀释多少个梯度?还有RNA模板量2ug是不是有点多呢? 由于是第一次要做Qpcr,所以好多不太懂的,谢谢解答!
12楼2013-01-05 16:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by czcpudai at 2013-01-05 16:44:12
你好,我最近打算做QpCR,模板是cDNA,当时反转录的时候是根据promega
的M-MLV逆转录酶说明书进行的,使用的RNA量是2ug。这样子我觉得出的cDNA浓度也是蛮大的,如果我接着做QPCR的话,大概需要稀释多少个梯度?还有 ...

根据你提RNA时的浓度来定,反转录时RNA一般在1000左右吧,若提RNA浓度太高,在溶解时适当多加无酶水溶解。
既然你初次做,建议就当练手吧,调整你的cDNA浓度到1000左右
13楼2013-01-05 20:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杜越欧 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 5/250 2026-08-24 21:51 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +6 scalable 2026-08-24 6/300 2026-08-24 20:28 by 苦寒来香
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了!? +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见