应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR的模板浓度
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 5598  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

杜越欧

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR的模板浓度

本人第一次做荧光定量PCR，得到的CT值不是很理想，查阅得CT值在18-22之间比较理想，想问一下，同一批实验，加看家基因的反应液中和加目的基因的反应液中的模板浓度可以不同么，以获得理想的CT值？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-28 09:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

可帅儿

银虫 (正式写手)
杜越欧: 回帖置顶 2012-03-30 13:29:46
引用回帖:
6楼: Originally posted by 杜越欧 at 2012-03-29 15:50:11:
加了2微升，20微升体系

应该差不多了这个量，可以的话能稍微多一点。
赞一下 回复此楼
追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
7楼2012-03-29 16:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 欢迎常来~ 2012-03-28 18:41:14
首先 模板量必须加等量的，这样内参才能对目的基因相对定量啊。其次 正常的Ct值范围为18-30之间，最好为23左右。一般一个20ul的反应体系里模板量最大为1ug。
其次，不知楼主的Ct值是太高还是太低，若是太高，那么说明模板浓度太低，这样楼主可以在提RNA的时候调整RNA浓度；若是太低，说明模板浓度过高，楼主可以适当降低模板浓度。若是Ct值太低的话，楼主还可以做个浓度梯度，这样既可以得到引物扩增效率又可以得到在最佳Ct值下的模板浓度。这样就对自己的实验做到了心里有数，在以后的实验中也会事半功倍
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2012-03-28 18:25:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-28 11:07:57
个人看法：
1. 没有说18-22个Ct值是合适的，我认为在35个Ct值前都能说明问题（当然能这里有涉及Ct值矫正或模板量、阙值等众多问题），只是30左右的Ct值需要多次实验确定稳定的数据结果后方可用
2. 为什么要内参和检测基因的模板浓度不同，如果不同了的话你如何去标准化你说有的样品？况且，浓度不同肯定涉及稀释过程，定量中多任何不必要的步骤都能带来操作误差导致不规范的统计结果。所以不明白你这个做法有什么意义
希望有所帮助，如有说错，请高手指正
赞一下(2人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-03-28 09:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-28 09:30:10:
个人看法：
1. 没有说18-22个Ct值是合适的，我认为在35个Ct值前都能说明问题（当然能这里有涉及Ct值矫正或模板量、阙值等众多问题），只是30左右的Ct值需要多次实验确定稳定的数据结果后方可用
2. 为什么要内参 ...

浓度不同是因为发现，管家基因的CT值还算理想，而目的基因的CT值就过高，但是最高的才29，照您的意思好像也不算高。那您的意思是不是只要做两三次数值稳定，只要在35以下就都可以啊？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-28 10:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可帅儿

银虫 (正式写手)
是不是模板量提取不足呢？反应体系里模板加多少啊？
赞一下 回复此楼
追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
4楼2012-03-28 16:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-03-28 16:09:55:
是不是模板量提取不足呢？反应体系里模板加多少啊？

加了2微升，20微升体系
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-29 15:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-03-29 16:44:19:
应该差不多了这个量，可以的话能稍微多一点。

但是一次做的pcr都是一个模板一个浓度的，看家基因的CT值就很低在13-15之间，而目的基因的CT值却很高在28-30之间，这是怎么回事，到底模板浓度是高还是低啊？求解
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-30 13:29:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 杜越欧 at 2012-03-30 13:29:37:
但是一次做的pcr都是一个模板一个浓度的，看家基因的CT值就很低在13-15之间，而目的基因的CT值却很高在28-30之间，这是怎么回事，到底模板浓度是高还是低啊？求解

是因为你的目的基因表达丰度低或者是你的引物质量不是很完美。建议你增加模板量的同时减少循环数
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-30 15:03:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-03-30 15:03:08:
是因为你的目的基因表达丰度低或者是你的引物质量不是很完美。建议你增加模板量的同时减少循环数

循环数我一直用的都是40，减少的幅度大概多少呢，这样就能使目的基因和管家基因的ct值相近么？
赞一下 回复此楼
10楼2012-03-31 12:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杜越欧 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +5 不逢春 2026-04-05 6/300 2026-04-05 21:50 by 不逢春
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 求调剂 +4 wos666 2026-04-03 4/200 2026-04-05 11:48 by arrow8852
[考研] 283求调剂 +10 A child 2026-04-04 10/500 2026-04-05 08:22 by qlm5820
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +6 双马尾痞老板2 2026-03-31 6/300 2026-04-04 22:29 by hemengdong
[考研] 一志愿南农090401，268，求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 生物学求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 3/150 2026-04-03 10:28 by macy2011
[考研] 复试调剂 +3 bvzz 2026-04-01 3/150 2026-04-03 09:47 by 蓝云思雨
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 一志愿复旦材料，英一专硕，总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 一志愿大工学硕，求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
[考研] 0817化工学硕调剂 +11 努力上岸中！ 2026-03-31 11/550 2026-04-01 20:30 by 赖春艳
[考研] 省双一流重点一本大学招收调剂 +4 wwwwffffff 2026-03-31 7/350 2026-04-01 15:23 by wwwwffffff
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭