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荧光定量PCR的模板浓度
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| 本人第一次做荧光定量PCR，得到的CT值不是很理想，查阅得CT值在18-22之间比较理想，想问一下，同一批实验，加看家基因的反应液中和加目的基因的反应液中的模板浓度可以不同么，以获得理想的CT值？ |
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 分子生物 |
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孙启亮
金虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 欢迎常来~ 2012-03-28 18:41:14
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 欢迎常来~ 2012-03-28 18:41:14
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首先 模板量必须加等量的，这样内参才能对目的基因相对定量啊。其次 正常的Ct值范围为18-30之间，最好为23左右。一般一个20ul的反应体系里模板量最大为1ug。 其次，不知楼主的Ct值是太高还是太低，若是太高，那么说明模板浓度太低，这样楼主可以在提RNA的时候调整RNA浓度；若是太低，说明模板浓度过高，楼主可以适当降低模板浓度。若是Ct值太低的话，楼主还可以做个浓度梯度，这样既可以得到引物扩增效率又可以得到在最佳Ct值下的模板浓度。这样就对自己的实验做到了心里有数，在以后的实验中也会事半功倍 |
5楼2012-03-28 18:25:49
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
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2楼2012-03-28 09:30:10
3楼2012-03-28 10:20:13
4楼2012-03-28 16:09:55
10