24小时热门版块排行榜    

查看: 3535  |  回复: 10

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证,除目的片段外还有一条带,什么原因? 已有3人参与

如题,引物T7/SP6,目的片段大小为450bp。

蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证,除目的片段外还有一条带,什么原因?
T7-SP6.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

www------sr-------------
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
贤愚Libra(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:29:08
我们也用你这种marker,看上去确实目的条带太弱了,反而700多的条带很亮。不知道你连接的片段多大,是不是连了两个进去?另外,电泳图上半部分很亮,不知道是不是紫外光没照均匀?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-08-10 10:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
贤愚Libra(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:28:56
虽然不知道你的marker的大小,但感觉你的扩增产物可能不是你的target,也许是些非特异性扩增?特别许多产物大小还不一致?是不是这两个引物配对不是太好还是扩增条件未优化?有无阳性对照?(两个引物不会是同方向的 吧?)
2楼2014-08-10 09:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-10 09:48:46
虽然不知道你的marker的大小,但感觉你的扩增产物可能不是你的target,也许是些非特异性扩增?特别许多产物大小还不一致?是不是这两个引物配对不是太好还是扩增条件未优化?有无阳性对照?(两个引物不会是同方向的 ...

T7/SP6是T载体上的通用引物,应该不是引物的问题,我的marker是100bp的marker,最上面是1500,往下以此是1000bp,900bp,800bp……,上面的600-700bp间的带是我的目的片段,下面400-500bp间的带是不该出现的带。
www------sr-------------
3楼2014-08-10 10:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


引用回帖:
3楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-09 21:01:35
T7/SP6是T载体上的通用引物,应该不是引物的问题,我的marker是100bp的marker,最上面是1500,往下以此是1000bp,900bp,800bp……,上面的600-700bp间的带是我的目的片段,下面400-500bp间的带是不该出现的带。...

你不是说你的目的片段大小为450bp吗?
T7/SP6是测序引物吧,所以我怀疑这两个引物是否有可能都是正向(或反向)引物的可能性。
5楼2014-08-10 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-10 10:03:37
我们也用你这种marker,看上去确实目的条带太弱了,反而700多的条带很亮。不知道你连接的片段多大,是不是连了两个进去?另外,电泳图上半部分很亮,不知道是不是紫外光没照均匀?
...

不是的,上面亮的是我的目的片段(目的片段加载体部分序列),下面弱的是杂带。胶上部分亮可能是因为我将染料加到胶里的原因。
www------sr-------------
6楼2014-08-10 12:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-10 10:06:15
你不是说你的目的片段大小为450bp吗?
T7/SP6是测序引物吧,所以我怀疑这两个引物是否有可能都是正向(或反向)引物的可能性。...

我用的引物时T7/SP6,所以目的片段450加上载体部分序列后就是600多bp了。
www------sr-------------
7楼2014-08-10 12:18:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-10 12:15:59
不是的,上面亮的是我的目的片段(目的片段加载体部分序列),下面弱的是杂带。胶上部分亮可能是因为我将染料加到胶里的原因。...

我开始理解错了,下面那些是非特异条带的话,优化一下PCR体系就会好了吧。目的条带那么浓,应该没关系的。
8楼2014-08-10 12:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-10 12:22:55
我开始理解错了,下面那些是非特异条带的话,优化一下PCR体系就会好了吧。目的条带那么浓,应该没关系的。...

但 我觉得也不应该是非特异条带吧 因为有的有有的没啊
www------sr-------------
9楼2014-08-10 14:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-10 14:14:54
但 我觉得也不应该是非特异条带吧 因为有的有有的没啊...

大部分都有,你降低模板浓度,提高一下退货温度,扩增试试。
10楼2014-08-10 14:30:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 贤愚Libra 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +9 申子申申 2026-03-19 15/750 2026-03-21 17:31 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +5 半拉月丙 2026-03-20 5/250 2026-03-21 16:51 by 棒棒球手
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-17 8/400 2026-03-21 02:12 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
请填处理意见