应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证，除目的片段外还有一条带，什么原因？
111/2返回列表12下一页
查看: 3589  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证，除目的片段外还有一条带，什么原因？ 已有3人参与

如题，引物T7/SP6，目的片段大小为450bp。

蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证，除目的片段外还有一条带，什么原因？
T7-SP6.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
www------sr-------------
1楼 2014-08-10 09:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
贤愚Libra(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:29:08
我们也用你这种marker，看上去确实目的条带太弱了，反而700多的条带很亮。不知道你连接的片段多大，是不是连了两个进去？另外，电泳图上半部分很亮，不知道是不是紫外光没照均匀？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-08-10 10:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
贤愚Libra(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:28:56
虽然不知道你的marker的大小，但感觉你的扩增产物可能不是你的target，也许是些非特异性扩增？特别许多产物大小还不一致？是不是这两个引物配对不是太好还是扩增条件未优化？有无阳性对照？（两个引物不会是同方向的 吧？）
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-10 09:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-10 09:48:46
虽然不知道你的marker的大小，但感觉你的扩增产物可能不是你的target，也许是些非特异性扩增？特别许多产物大小还不一致？是不是这两个引物配对不是太好还是扩增条件未优化？有无阳性对照？（两个引物不会是同方向的 ...

T7/SP6是T载体上的通用引物，应该不是引物的问题，我的marker是100bp的marker,最上面是1500，往下以此是1000bp,900bp,800bp……，上面的600-700bp间的带是我的目的片段，下面400-500bp间的带是不该出现的带。
赞一下 回复此楼
www------sr-------------
3楼2014-08-10 10:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader
引用回帖:
3楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-09 21:01:35
T7/SP6是T载体上的通用引物，应该不是引物的问题，我的marker是100bp的marker,最上面是1500，往下以此是1000bp,900bp,800bp……，上面的600-700bp间的带是我的目的片段，下面400-500bp间的带是不该出现的带。...

你不是说你的目的片段大小为450bp吗？
T7/SP6是测序引物吧，所以我怀疑这两个引物是否有可能都是正向（或反向）引物的可能性。
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-10 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-10 10:03:37
我们也用你这种marker，看上去确实目的条带太弱了，反而700多的条带很亮。不知道你连接的片段多大，是不是连了两个进去？另外，电泳图上半部分很亮，不知道是不是紫外光没照均匀？
...

不是的，上面亮的是我的目的片段（目的片段加载体部分序列），下面弱的是杂带。胶上部分亮可能是因为我将染料加到胶里的原因。
赞一下 回复此楼
www------sr-------------
6楼2014-08-10 12:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-10 10:06:15
你不是说你的目的片段大小为450bp吗？
T7/SP6是测序引物吧，所以我怀疑这两个引物是否有可能都是正向（或反向）引物的可能性。...

我用的引物时T7/SP6，所以目的片段450加上载体部分序列后就是600多bp了。
赞一下 回复此楼
www------sr-------------
7楼2014-08-10 12:18:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-10 12:15:59
不是的，上面亮的是我的目的片段（目的片段加载体部分序列），下面弱的是杂带。胶上部分亮可能是因为我将染料加到胶里的原因。...

我开始理解错了，下面那些是非特异条带的话，优化一下PCR体系就会好了吧。目的条带那么浓，应该没关系的。
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-10 12:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-10 12:22:55
我开始理解错了，下面那些是非特异条带的话，优化一下PCR体系就会好了吧。目的条带那么浓，应该没关系的。...

但 我觉得也不应该是非特异条带吧 因为有的有有的没啊
赞一下 回复此楼
www------sr-------------
9楼2014-08-10 14:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-10 14:14:54
但 我觉得也不应该是非特异条带吧 因为有的有有的没啊...

大部分都有，你降低模板浓度，提高一下退货温度，扩增试试。
赞一下 回复此楼
10楼2014-08-10 14:30:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 贤愚Libra 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工学硕294分，求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 335求调剂 +20 想上岸呀！！ 2026-04-12 23/1150 2026-04-17 10:50 by cuisz
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 297，工科调剂? +4 河南农业大学-能 2026-04-14 4/200 2026-04-16 22:52 by wulijun2012
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 297，工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 考研求调剂 +6 ban班小七 2026-04-11 6/300 2026-04-14 14:06 by 哆啦A梦只是个梦
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 293求调剂 +16 我爱高数高数爱� 2026-04-12 18/900 2026-04-13 21:47 by 学员JpLReM
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭