24小时热门版块排行榜    

查看: 3224  |  回复: 12

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带

如题,最近在做蓝白斑筛选,目的条带是原来PCR产物切胶回收的,用的是宝生物的PMD18-T载体,感受态是自己实验室制的,在平板上过夜培养后有蓝斑也有白斑,挑取白斑菌落,在PCR反应体系中蘸一蘸进行菌落PCR,但是电泳结果没有条带,请问各位虫友是载体自连了吗?多板均有蓝斑白斑,都是载体自连吗?
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

PCR技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 12:54:56
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?
2楼2013-07-26 09:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 12:56:26
做个阴性对照平板就知道了。
3楼2013-07-26 10:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


没对照没真相
4楼2013-07-26 11:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 09:51:10
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?

没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?
5楼2013-07-26 12:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 史前五百年 at 2013-07-26 10:02:06
做个阴性对照平板就知道了。

阴性对照平板是不加什么?我做的对照是不加载体直接加感受态平板,什么都没有
6楼2013-07-26 12:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biomed_fanyi at 2013-07-26 11:45:29
没对照没真相

请问怎么对照呢?
7楼2013-07-26 12:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
windycui(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:23
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,准备下周重新做做试试 2013-07-27 10:28:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by windycui at 2013-07-26 12:18:01
阴性对照平板是不加什么?我做的对照是不加载体直接加感受态平板,什么都没有...

第一:你做PCR实验室做阳性对照么?没有的话最有可能的是退火温度的问题。
第二:阴性对照打错了,是阳性对照,TAKARA 上面的pMD18-T Vector 的说明书里面有介绍。
第三:可以挑些蓝色的点进行菌液PCR.
8楼2013-07-26 13:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

denghengning

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:33
一、做一个对照
二、看是否是载体空载了,或许因为连接效率太低,如果有必要,可以多挑几个菌来做一做。
9楼2013-07-26 14:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 17:44:43
引用回帖:
5楼: Originally posted by windycui at 2013-07-26 12:16:43
没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?...

PCR筛选做对照是常识,因为可能有假阳性。负对照一般就是master mix无模板对照,正对照就是含有载体中有插入已知片段的菌落,就是确定PCR体系没有问题。
10楼2013-07-26 14:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 windycui 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 女博士高校择业三天之内签合同,求支招 +22 chengmy19 2024-05-23 26/1300 2024-05-23 16:28 by 鱼翔浅底1
[论文投稿] wiely投稿状态 10+3 甄小鱼 2024-05-23 3/150 2024-05-23 15:42 by 莱茵润色
[基金申请] 国自然的面上项目,5个审稿人,5个B能上会吗? 4+11 lancet0903 2024-05-20 33/1650 2024-05-23 14:07 by 天狼2019
[硕博家园] 蹲一个男朋友 +27 伊伊莎贝拉 2024-05-17 53/2650 2024-05-23 13:18 by zbaqgxj
[电化学] 如何证明电极上镀上金了? 10+4 刻印时光 2024-05-22 4/200 2024-05-23 11:31 by 牵着小猫跑步
[基金申请] 河北省基金 +14 3101251516 2024-05-16 22/1100 2024-05-23 10:50 by 3101251516
[教师之家] 经常觉得挺累的 +9 zylfront 2024-05-22 15/750 2024-05-23 10:05 by ayalex
[硕博家园] 超过35岁的海外博士还可以进高校吗? +6 905452934 2024-05-20 7/350 2024-05-23 07:54 by luwangba
[教师之家] 来用亲身体会,一起说说年轻老师的辛苦 +20 zylfront 2024-05-17 26/1300 2024-05-23 07:53 by luwangba
[论文投稿] 求推荐期刊 20+4 好困好困a 2024-05-18 5/250 2024-05-22 22:41 by 知识产权服务
[论文投稿] 求能源类,故障诊断,机器学习结合的EI期刊。 36+3 wj0318 2024-05-19 5/250 2024-05-22 22:05 by 知识产权服务
[硕博家园] 2024/2025碳纳米材料方向博士/科研助理申请 +4 小二仙 2024-05-21 7/350 2024-05-22 09:51 by 呼呼一哈黑
[基金申请] 国自然等 80+4 胖虎 2024-05-21 12/600 2024-05-22 09:47 by nono2009
[教师之家] 白天不懂夜的黑,90后青椒与60后老板 +6 zylfront 2024-05-18 7/350 2024-05-22 09:28 by songwz
[基金申请] 太诡异了,五月底还有没有送审的。。 +12 hdzw9071 2024-05-21 12/600 2024-05-21 12:43 by dxcharlary
[论文投稿] Angew拒稿重投经历大修返回又送审了 48+4 YOONAZHA 2024-05-18 6/300 2024-05-21 10:35 by jurkat.1640
[基金申请] 申请基金代表性成果 +14 lancet0903 2024-05-17 20/1000 2024-05-21 00:23 by dxcharlary
[基金申请] 基金评审 +4 阿呆不呆 2024-05-20 4/200 2024-05-20 15:10 by 一路向东
[基金申请] 有知道工材e01情况的吗? +13 xiaopang8958 2024-05-17 19/950 2024-05-20 09:52 by 蜕变123~
[论文投稿] Nano-Micro Letters投稿可以用PDF上传吗 5+4 962511369 2024-05-18 4/200 2024-05-19 15:47 by ca0yan9
信息提示
请填处理意见