[求助] 蓝白斑筛选菌落成串

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1楼2012-07-09 15:49:16

xinongfish

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楼主你好！
蓝白斑筛选，出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的，这些都不重要，重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题，菌落太少，有可能是你感受态细胞的问题，你换一个或者买一些感受态试试；另外培养时间不要太长，37℃培养12h，就可以挑取单克隆了，建议安排好时间，白天来挑单克隆，这样的话比较容易看。
PS：培养时间过长，容易让菌落连在一起，还可能形成卫星菌落，会影响你实验的准确性。

2楼2012-07-09 16:21:06

东方龙飞

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假阳性，卫星菌落就是这样。大部分都是假的

3楼2012-07-09 19:59:09

ZOEY21

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2楼: Originally posted by xinongfish at 2012-07-09 16:21:06
楼主你好！
蓝白斑筛选，出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的，这些都不重要，重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题，菌落太少，有可能是你感受态细胞的问题，你换一个或者买一些感受态试试；另 ...

谢谢做了菌落PCR 糖葫芦都炮灰了卫星菌落啊

4楼2012-07-09 20:12:05

ZOEY21

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3楼: Originally posted by 东方龙飞 at 2012-07-09 19:59:09
假阳性，卫星菌落就是这样。大部分都是假的

谢谢原来这就是卫星菌落 PCR刚检测了果然都炮灰了

5楼2012-07-09 20:12:43

陈年芬芳

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多是假阳性，一般培养不要过久，另外照你的情况，可能感受态的活力不够，可能由于储存时间太久了，另外转化效率也很低，涂板前可以先离心下，弃掉部分上清，然后将剩余的全部涂板。

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ZOEY21

6楼2012-07-10 15:05:28

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6楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-10 15:05:28
多是假阳性，一般培养不要过久，另外照你的情况，可能感受态的活力不够，可能由于储存时间太久了，另外转化效率也很低，涂板前可以先离心下，弃掉部分上清，然后将剩余的全部涂板。

多谢帮助！我买的感受态，在-70放了将近一个月，影响这么大啊。。。涂板前确实离心来着，只留了100ul，请问多大转速离心多久合适啊？我开始用4000rpm 3min，结果剩余的都成块混不匀；后来改2min上清液又不澄清。。。

7楼2012-07-10 15:43:27

174609113

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糖葫芦是不是没涂开啊

8楼2012-07-10 20:46:20

hzlatqh

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引用回帖:

7楼: Originally posted by ZOEY21 at 2012-07-10 15:43:27
多谢帮助！我买的感受态，在-70放了将近一个月，影响这么大啊。。。涂板前确实离心来着，只留了100ul，请问多大转速离心多久合适啊？我开始用4000rpm 3min，结果剩余的都成块混不匀；后来改2min上清液又不澄清。。 ...

感受态-70度一个月应该不至于降低很多啊。。。

两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天

9楼2012-07-10 22:15:54

燕子9883

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离心的速度影响不大，4000和13000没什么差异，离心时间不要长，转速上去就下来，不需要计时间。

10楼2012-07-11 22:31:42