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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选 菌落成串
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选 菌落成串

这几天一直做蓝白斑筛选 头两次因为LB培养基pH问题啥也没长出来第三次pH调好了，菌也长出来了，可为什么长得那么怪三个板，一板长了3个斑，长得那叫个白里透蓝啊；二板长了一个蓝斑和若干白斑，白斑有的连成串串，糖葫芦一样啊，有的是独立的圆斑；三板没有蓝斑，一串的白斑啊，那就是一串糖葫芦啊这是肿木回事啊~求教啊 载体是pGEM-Teasy 感受态是DH5α
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1楼 2012-07-09 15:49:16
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinongfish at 2012-07-09 16:21:06
楼主你好！
蓝白斑筛选，出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的，这些都不重要，重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题，菌落太少，有可能是你感受态细胞的问题，你换一个或者买一些感受态试试；另 ...

谢谢 做了菌落PCR 糖葫芦都炮灰了 卫星菌落啊
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4楼2012-07-09 20:12:05
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 东方龙飞 at 2012-07-09 19:59:09
假阳性，卫星菌落就是这样。大部分都是假的

谢谢 原来这就是卫星菌落 PCR刚检测了 果然都炮灰了
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5楼2012-07-09 20:12:43
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-10 15:05:28
多是假阳性，一般培养不要过久，另外照你的情况，可能感受态的活力不够，可能由于储存时间太久了，另外转化效率也很低，涂板前可以先离心下，弃掉部分上清，然后将剩余的全部涂板。

多谢帮助！我买的感受态，在-70放了将近一个月，影响这么大啊。。。涂板前确实离心来着，只留了100ul，请问多大转速离心多久合适啊？我开始用4000rpm 3min，结果剩余的都成块混不匀；后来改2min上清液又不澄清。。。
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7楼2012-07-10 15:43:27
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 174609113 at 2012-07-10 20:46:20
糖葫芦   是不是  没涂开啊

不知道会不会是我离心太久没有混匀所以就涂不开啊
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11楼2012-07-12 08:37:36
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-10 22:15:54
感受态-70度一个月应该不至于降低很多啊。。。...

站里有人说时间长了效率会降低 也有人说没问题 -70的话一年还在用 我已经不知道该信哪种说法了
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12楼2012-07-12 08:42:06
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:31:42
离心的速度影响不大，4000和13000没什么差异，离心时间不要长，转速上去就下来，不需要计时间。

哦 这样的啊 好 谢谢
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13楼2012-07-12 08:43:20
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-14 19:36:30
嗯 的确。。。还是根据自己在实验室的经验来的靠谱...

获得经验的过程好是痛苦
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15楼2012-07-16 08:50:37
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:31:42
离心的速度影响不大，4000和13000没什么差异，离心时间不要长，转速上去就下来，不需要计时间。

您好 求教啊 我又做了一次筛选 发现离心后一直离不下去 上清液里一直都还有絮状物 去上清会丢失很多 师姐说可能细菌死掉了 是吗 这次平皿又长得让人及其郁闷
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16楼2012-07-16 08:57:05
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