[求助] 蓝白斑筛选菌落成串

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1楼2012-07-09 15:49:16

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2楼: Originally posted by xinongfish at 2012-07-09 16:21:06
楼主你好！
蓝白斑筛选，出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的，这些都不重要，重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题，菌落太少，有可能是你感受态细胞的问题，你换一个或者买一些感受态试试；另 ...

谢谢做了菌落PCR 糖葫芦都炮灰了卫星菌落啊

4楼2012-07-09 20:12:05

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3楼: Originally posted by 东方龙飞 at 2012-07-09 19:59:09
假阳性，卫星菌落就是这样。大部分都是假的

谢谢原来这就是卫星菌落 PCR刚检测了果然都炮灰了

5楼2012-07-09 20:12:43

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6楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-10 15:05:28
多是假阳性，一般培养不要过久，另外照你的情况，可能感受态的活力不够，可能由于储存时间太久了，另外转化效率也很低，涂板前可以先离心下，弃掉部分上清，然后将剩余的全部涂板。

多谢帮助！我买的感受态，在-70放了将近一个月，影响这么大啊。。。涂板前确实离心来着，只留了100ul，请问多大转速离心多久合适啊？我开始用4000rpm 3min，结果剩余的都成块混不匀；后来改2min上清液又不澄清。。。

7楼2012-07-10 15:43:27

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8楼: Originally posted by 174609113 at 2012-07-10 20:46:20
糖葫芦是不是没涂开啊

不知道

会不会是我离心太久没有混匀所以就涂不开啊

11楼2012-07-12 08:37:36

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9楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-10 22:15:54
感受态-70度一个月应该不至于降低很多啊。。。...

站里有人说时间长了效率会降低也有人说没问题 -70的话一年还在用我已经不知道该信哪种说法了

12楼2012-07-12 08:42:06

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10楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:31:42
离心的速度影响不大，4000和13000没什么差异，离心时间不要长，转速上去就下来，不需要计时间。

哦这样的啊好谢谢

13楼2012-07-12 08:43:20

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14楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-14 19:36:30
嗯的确。。。还是根据自己在实验室的经验来的靠谱...

获得经验的过程好是痛苦

15楼2012-07-16 08:50:37

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10楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:31:42
离心的速度影响不大，4000和13000没什么差异，离心时间不要长，转速上去就下来，不需要计时间。

您好求教啊我又做了一次筛选发现离心后一直离不下去上清液里一直都还有絮状物去上清会丢失很多师姐说可能细菌死掉了是吗这次平皿又长得让人及其郁闷

16楼2012-07-16 08:57:05