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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选 菌落成串

这几天一直做蓝白斑筛选 头两次因为LB培养基pH问题啥也没长出来第三次pH调好了,菌也长出来了,可为什么长得那么怪三个板,一板长了3个斑,长得那叫个白里透蓝啊;二板长了一个蓝斑和若干白斑,白斑有的连成串串,糖葫芦一样啊,有的是独立的圆斑;三板没有蓝斑,一串的白斑啊,那就是一串糖葫芦啊这是肿木回事啊~求教啊 载体是pGEM-Teasy 感受态是DH5α
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:31:42
离心的速度影响不大,4000和13000没什么差异,离心时间不要长,转速上去就下来,不需要计时间。

您好 求教啊 我又做了一次筛选 发现离心后一直离不下去 上清液里一直都还有絮状物 去上清会丢失很多 师姐说可能细菌死掉了 是吗 这次平皿又长得让人及其郁闷
16楼2012-07-16 08:57:05
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 20:10:49
楼主你好!
蓝白斑筛选,出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的,这些都不重要,重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题,菌落太少,有可能是你感受态细胞的问题,你换一个或者买一些感受态试试;另外培养时间不要太长,37℃培养12h,就可以挑取单克隆了,建议安排好时间,白天来挑单克隆,这样的话比较容易看。
PS:培养时间过长,容易让菌落连在一起,还可能形成卫星菌落,会影响你实验的准确性。
2楼2012-07-09 16:21:06
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东方龙飞

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 20:10:54
假阳性,卫星菌落就是这样。大部分都是假的
3楼2012-07-09 19:59:09
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xinongfish at 2012-07-09 16:21:06
楼主你好!
蓝白斑筛选,出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的,这些都不重要,重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题,菌落太少,有可能是你感受态细胞的问题,你换一个或者买一些感受态试试;另 ...

谢谢 做了菌落PCR 糖葫芦都炮灰了 卫星菌落啊
4楼2012-07-09 20:12:05
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