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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选 菌落成串
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[求助] 蓝白斑筛选 菌落成串

这几天一直做蓝白斑筛选 头两次因为LB培养基pH问题啥也没长出来第三次pH调好了，菌也长出来了，可为什么长得那么怪三个板，一板长了3个斑，长得那叫个白里透蓝啊；二板长了一个蓝斑和若干白斑，白斑有的连成串串，糖葫芦一样啊，有的是独立的圆斑；三板没有蓝斑，一串的白斑啊，那就是一串糖葫芦啊这是肿木回事啊~求教啊 载体是pGEM-Teasy 感受态是DH5α
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1楼 2012-07-09 15:49:16
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xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 20:10:49
楼主你好！
蓝白斑筛选，出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的，这些都不重要，重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题，菌落太少，有可能是你感受态细胞的问题，你换一个或者买一些感受态试试；另外培养时间不要太长，37℃培养12h，就可以挑取单克隆了，建议安排好时间，白天来挑单克隆，这样的话比较容易看。
PS：培养时间过长，容易让菌落连在一起，还可能形成卫星菌落，会影响你实验的准确性。
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2楼2012-07-09 16:21:06
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东方龙飞

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-09 20:10:54
假阳性，卫星菌落就是这样。大部分都是假的
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3楼2012-07-09 19:59:09
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinongfish at 2012-07-09 16:21:06
楼主你好！
蓝白斑筛选，出现蓝斑、白斑、蓝白相间的斑都是很正常的，这些都不重要，重要的是你要能挑到白色的菌落单克隆。针对你的问题，菌落太少，有可能是你感受态细胞的问题，你换一个或者买一些感受态试试；另 ...

谢谢 做了菌落PCR 糖葫芦都炮灰了 卫星菌落啊
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4楼2012-07-09 20:12:05
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 东方龙飞 at 2012-07-09 19:59:09
假阳性，卫星菌落就是这样。大部分都是假的

谢谢 原来这就是卫星菌落 PCR刚检测了 果然都炮灰了
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5楼2012-07-09 20:12:43
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ZOEY21: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 不过没有更多金币了 2012-07-10 15:38:58
多是假阳性，一般培养不要过久，另外照你的情况，可能感受态的活力不够，可能由于储存时间太久了，另外转化效率也很低，涂板前可以先离心下，弃掉部分上清，然后将剩余的全部涂板。
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ZOEY21
6楼2012-07-10 15:05:28
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-10 15:05:28
多是假阳性，一般培养不要过久，另外照你的情况，可能感受态的活力不够，可能由于储存时间太久了，另外转化效率也很低，涂板前可以先离心下，弃掉部分上清，然后将剩余的全部涂板。

多谢帮助！我买的感受态，在-70放了将近一个月，影响这么大啊。。。涂板前确实离心来着，只留了100ul，请问多大转速离心多久合适啊？我开始用4000rpm 3min，结果剩余的都成块混不匀；后来改2min上清液又不澄清。。。
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7楼2012-07-10 15:43:27
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174609113

银虫 (小有名气)
糖葫芦   是不是  没涂开啊
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8楼2012-07-10 20:46:20
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ZOEY21 at 2012-07-10 15:43:27
多谢帮助！我买的感受态，在-70放了将近一个月，影响这么大啊。。。涂板前确实离心来着，只留了100ul，请问多大转速离心多久合适啊？我开始用4000rpm 3min，结果剩余的都成块混不匀；后来改2min上清液又不澄清。。 ...

感受态-70度一个月应该不至于降低很多啊。。。
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两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
9楼2012-07-10 22:15:54
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燕子9883

铜虫 (初入文坛)
离心的速度影响不大，4000和13000没什么差异，离心时间不要长，转速上去就下来，不需要计时间。
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10楼2012-07-11 22:31:42
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