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windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带

如题,最近在做蓝白斑筛选,目的条带是原来PCR产物切胶回收的,用的是宝生物的PMD18-T载体,感受态是自己实验室制的,在平板上过夜培养后有蓝斑也有白斑,挑取白斑菌落,在PCR反应体系中蘸一蘸进行菌落PCR,但是电泳结果没有条带,请问各位虫友是载体自连了吗?多板均有蓝斑白斑,都是载体自连吗?
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denghengning

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:33
一、做一个对照
二、看是否是载体空载了,或许因为连接效率太低,如果有必要,可以多挑几个菌来做一做。
9楼2013-07-26 14:03:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 12:54:56
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?
2楼2013-07-26 09:51:10
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史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 12:56:26
做个阴性对照平板就知道了。
3楼2013-07-26 10:02:06
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 09:51:10
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?

没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?
5楼2013-07-26 12:16:43
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