| 查看: 2326 | 回复: 16 | |||
夏天的普洱茶木虫 (著名写手)
|
[求助]
目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
|
||
| 我的目的片段大概有1200左右，连接到T载体后做蓝白斑筛选，挑取多个白斑提取质粒以后做PCR，结果P出来3条条带，分别是500，1500，3000，有人知道这是什么情况吗？求解答 |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨分散剂
已经有4人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有284人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
-
韩国海关检测食用植物油中的苯并芘用的是哪种方法？
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 构建载体后，菌液PCR，没有目的条带！！！
已经有10人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- PCR连接T载体测序正确，提质粒却是2600多，是T载体那么大的分子量，为什么啊/
已经有3人回复
- 10kb的pcr产物能连到T载体上吗
已经有17人回复
- pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接
已经有16人回复
- PCR片段与载体连接不上
已经有6人回复
- PCR产物连接上载体，菌液测序和NCBI上比对结果有所不同
已经有6人回复
- 荧光定量pcr溶解曲线好几个峰，但是电泳只有一条目的条带，怎么回事
已经有5人回复
- 诡异的单酶切连接转化——目的片段居然和原来的T载体连了起来
已经有6人回复
- 急!要连表达载体的目的片段可以是PCR后回收的产物吗？已经连中间载体验证过了
已经有3人回复
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- PCR阳性检测结果，空载体和水都能扩的出来，怎么回事呢？
已经有4人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- 求助啊！转质粒出现问题了！
已经有13人回复
- PCR产物与T载体连不上 求助
已经有29人回复
- 【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
已经有23人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】测序问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】TA克隆
已经有15人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-05-22 13:41:22
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-05-22 13:41:22
|
推测原因: 1) 不是单菌落扩增结果?! 2) 引物扩增不特异!你的引物在片段上和载体上都有,不是载体上引物吧? 建议: 1) 载体说明上应该有检测引物序列RV-M/M13-47,用这对引物扩增检测试一试吧! 2) 或提出质粒后直接酶切鉴定,就可以,判定是否含目的基因. 3) 如果就想PCR鉴定,请设定对照或心中有数: 考虑一下你的质粒全长多少? 质粒全长: pMD19-T 约2700bp+片段1200bp?=3900bp? 空载应该扩出多大片段?(扩增时可以用空载质粒做个阴性对照) 目的质粒应该扩出多大片段? 设定对照再分析就容易找出原因! |
13楼2013-05-22 13:15:47
stevenshi021
新虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 545.3
- 红花: 5
- 帖子: 276
- 在线: 35.1小时
- 虫号: 2272292
- 注册: 2013-02-03
- 专业: 生物化学
2楼2013-05-20 11:12:34
3楼2013-05-20 11:27:49
夏天的普洱茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 69 (初中生)
- 金币: 5112.5
- 红花: 18
- 帖子: 1048
- 在线: 439.9小时
- 虫号: 1427657
- 注册: 2011-10-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2013-05-20 13:20:52
夏天的普洱茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 69 (初中生)
- 金币: 5112.5
- 红花: 18
- 帖子: 1048
- 在线: 439.9小时
- 虫号: 1427657
- 注册: 2011-10-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2013-05-20 13:23:17
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24345.5
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2326
- 在线: 622.9小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
6楼2013-05-20 16:30:33
夏天的普洱茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 69 (初中生)
- 金币: 5112.5
- 红花: 18
- 帖子: 1048
- 在线: 439.9小时
- 虫号: 1427657
- 注册: 2011-10-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2013-05-20 16:44:30
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24345.5
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2326
- 在线: 622.9小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
8楼2013-05-20 17:12:17
9楼2013-05-20 17:16:56
夏天的普洱茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 69 (初中生)
- 金币: 5112.5
- 红花: 18
- 帖子: 1048
- 在线: 439.9小时
- 虫号: 1427657
- 注册: 2011-10-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
10楼2013-05-20 17:30:23
6