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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR连接T载体测序正确，提质粒却是2600多，是T载体那么大的分子量，为什么啊/
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] PCR连接T载体测序正确，提质粒却是2600多，是T载体那么大的分子量，为什么啊/

连接T载体菌液测序正确，提质粒却是T载体那么大，是T载体那么大的分子量，为什么啊/难道5000marker会不准吗？还是我的菌液放到4度几天之后目的基因从T载体上掉下来了呢？
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1楼 2013-01-13 13:22:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-13 20:05:04
你确定质粒分子量的时候是否做了单酶切？一般盒子提出来的质粒基本上是超螺旋构象，跑得比线性分子（marker）快。如果未经酶切的质粒跑在2.6k左右，质粒实际上要大很多。
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2楼2013-01-13 14:17:38
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-13 14:17:38
你确定质粒分子量的时候是否做了单酶切？一般盒子提出来的质粒基本上是超螺旋构象，跑得比线性分子（marker）快。如果未经酶切的质粒跑在2.6k左右，质粒实际上要大很多。

没有酶切时跑胶显示的是2000-3000之间，我明天切了再求助你吧，可否把您的QQ号码给我啊？多谢啦
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3楼2013-01-13 22:40:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-01-13 22:40:10
没有酶切时跑胶显示的是2000-3000之间，我明天切了再求助你吧，可否把您的QQ号码给我啊？多谢啦...

安心吧，没有酶切的质粒跑到2000-3000的话肯定有插入啦。一般空在2.6kb的质粒会跑到1.5kb左右。我不上QQ的，sorry。
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4楼2013-01-14 02:25:55
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