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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

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[求助] 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异

我的目的片段大概有1200左右，连接到T载体后做蓝白斑筛选，挑取多个白斑提取质粒以后做PCR，结果P出来3条条带，分别是500，1500，3000，有人知道这是什么情况吗？求解答

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1楼 2013-05-20 10:38:52

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gyesang

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【答案】应助回帖

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-05-20 13:23:17
那我描述的清楚些哈。我用自己设计的引物从一个未知片段克隆出一段基因，大概有1200bp，这个片段胶回收以后加A连接到pMD19-T上，做蓝白斑筛选，挑取白色菌落活化，菌液提质粒，以质粒为模板进行扩增，就扩增出三个 ...

据你描述应该是高保真酶扩出来的平末端片段，推荐你试试可以连平末端的类似于T的pZeroback载体，效率很高