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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异

我的目的片段大概有1200左右,连接到T载体后做蓝白斑筛选,挑取多个白斑提取质粒以后做PCR,结果P出来3条条带,分别是500,1500,3000,有人知道这是什么情况吗?求解答
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-05-20 13:23:17
那我描述的清楚些哈。我用自己设计的引物从一个未知片段克隆出一段基因,大概有1200bp,这个片段胶回收以后加A连接到pMD19-T上,做蓝白斑筛选,挑取白色菌落活化,菌液提质粒,以质粒为模板进行扩增,就扩增出三个 ...

据你描述应该是高保真酶扩出来的平末端片段,推荐你试试可以连平末端的类似于T的pZeroback载体,效率很高
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-05-20 16:30:33
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
夏天的普洱茶(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-20 16:28:54
实验需要加入阴性对照与阳性对照,多条条带是PCR引物特异性不强造成的。
2楼2013-05-20 11:12:34
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
描述太不清楚了....请做好阴阳性对照...
3楼2013-05-20 11:27:49
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-20 11:12:34
实验需要加入阴性对照与阳性对照,多条条带是PCR引物特异性不强造成的。

谢谢,我们一般都不加阳性对照,应该是P不出条带才加阳性对照吧
4楼2013-05-20 13:20:52
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