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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异

我的目的片段大概有1200左右，连接到T载体后做蓝白斑筛选，挑取多个白斑提取质粒以后做PCR，结果P出来3条条带，分别是500，1500，3000，有人知道这是什么情况吗？求解答
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1楼2013-05-20 10:38:52
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-05-20 11:27:49
描述太不清楚了....请做好阴阳性对照...

那我描述的清楚些哈。我用自己设计的引物从一个未知片段克隆出一段基因，大概有1200bp，这个片段胶回收以后加A连接到pMD19-T上，做蓝白斑筛选，挑取白色菌落活化，菌液提质粒，以质粒为模板进行扩增，就扩增出三个条带
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5楼2013-05-20 13:23:17
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:54
实验需要加入阴性对照与阳性对照，多条条带是PCR引物特异性不强造成的。
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2楼2013-05-20 11:12:34
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
描述太不清楚了....请做好阴阳性对照...
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3楼2013-05-20 11:27:49
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-20 11:12:34
实验需要加入阴性对照与阳性对照，多条条带是PCR引物特异性不强造成的。

谢谢，我们一般都不加阳性对照，应该是P不出条带才加阳性对照吧
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4楼2013-05-20 13:20:52
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