应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
172/2返回列表上一页12
查看: 3392  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chenyawei

金虫 (小有名气)
★
夏天的普洱茶(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-21 00:47:09
引用回帖:
10楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-05-20 17:30:23
现在正在做呢，但是为什么PCR做不出来呢...

有可能是引物特异性不好，P出其他的东西了。maker对照的清楚吗？你的1500的有可能是目的片段吧。我们一般做菌落PCR，一条目的基因引物，一条载体引物的做
赞一下 回复此楼
11楼2013-05-20 19:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by chenyawei at 2013-05-20 19:05:26
有可能是引物特异性不好，P出其他的东西了。maker对照的清楚吗？你的1500的有可能是目的片段吧。我们一般做菌落PCR，一条目的基因引物，一条载体引物的做...

我的片段有1200，P出来明显大了。还有我没有载体引物，所以没有做
赞一下 回复此楼
12楼2013-05-20 21:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-05-22 13:41:22
推测原因:
1) 不是单菌落扩增结果?!
2) 引物扩增不特异!你的引物在片段上和载体上都有,不是载体上引物吧?

建议:
1)   载体说明上应该有检测引物序列RV-M/M13-47,用这对引物扩增检测试一试吧!
2)   或提出质粒后直接酶切鉴定,就可以,判定是否含目的基因.
3)   如果就想PCR鉴定,请设定对照或心中有数:
    考虑一下你的质粒全长多少?   质粒全长: pMD19-T 约2700bp+片段1200bp?=3900bp?
       空载应该扩出多大片段?(扩增时可以用空载质粒做个阴性对照)
       目的质粒应该扩出多大片段?
       设定对照再分析就容易找出原因!
赞一下(2人) 回复此楼
13楼2013-05-22 13:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stevenshi021

新虫 (小有名气)
都是什么实验标准，做实验没有对照那么这个实验与没有做是一样的。从小就要培养严谨的实验态度。
赞一下 回复此楼
14楼2013-05-23 10:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-23 10:20:23
都是什么实验标准，做实验没有对照那么这个实验与没有做是一样的。从小就要培养严谨的实验态度。

嗯嗯，谢谢
回复此楼
15楼2013-05-23 12:20:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

易翔仪冲

新虫 (初入文坛)
我也遇到了这种情况
赞一下 回复此楼
16楼2013-06-14 10:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 易翔仪冲 at 2013-06-14 10:12:24
我也遇到了这种情况

我的是载体不行了，全部都是自连，后连换了新的载体就好了。
赞一下 回复此楼
17楼2013-06-14 13:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏天的普洱茶 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 5/250 2026-08-24 21:51 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +6 scalable 2026-08-24 6/300 2026-08-24 20:28 by 苦寒来香
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭