24小时热门版块排行榜    

查看: 3244  |  回复: 12

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带

如题,最近在做蓝白斑筛选,目的条带是原来PCR产物切胶回收的,用的是宝生物的PMD18-T载体,感受态是自己实验室制的,在平板上过夜培养后有蓝斑也有白斑,挑取白斑菌落,在PCR反应体系中蘸一蘸进行菌落PCR,但是电泳结果没有条带,请问各位虫友是载体自连了吗?多板均有蓝斑白斑,都是载体自连吗?
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

PCR技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 12:54:56
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?
2楼2013-07-26 09:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 12:56:26
做个阴性对照平板就知道了。
3楼2013-07-26 10:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


没对照没真相
4楼2013-07-26 11:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 09:51:10
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?

没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?
5楼2013-07-26 12:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 史前五百年 at 2013-07-26 10:02:06
做个阴性对照平板就知道了。

阴性对照平板是不加什么?我做的对照是不加载体直接加感受态平板,什么都没有
6楼2013-07-26 12:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biomed_fanyi at 2013-07-26 11:45:29
没对照没真相

请问怎么对照呢?
7楼2013-07-26 12:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
windycui(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:23
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,准备下周重新做做试试 2013-07-27 10:28:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by windycui at 2013-07-26 12:18:01
阴性对照平板是不加什么?我做的对照是不加载体直接加感受态平板,什么都没有...

第一:你做PCR实验室做阳性对照么?没有的话最有可能的是退火温度的问题。
第二:阴性对照打错了,是阳性对照,TAKARA 上面的pMD18-T Vector 的说明书里面有介绍。
第三:可以挑些蓝色的点进行菌液PCR.
8楼2013-07-26 13:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

denghengning

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:33
一、做一个对照
二、看是否是载体空载了,或许因为连接效率太低,如果有必要,可以多挑几个菌来做一做。
9楼2013-07-26 14:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 17:44:43
引用回帖:
5楼: Originally posted by windycui at 2013-07-26 12:16:43
没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?...

PCR筛选做对照是常识,因为可能有假阳性。负对照一般就是master mix无模板对照,正对照就是含有载体中有插入已知片段的菌落,就是确定PCR体系没有问题。
10楼2013-07-26 14:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 windycui 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] F口信息学部拿面上,大概需要什么样的成果 +3 _奋黎_ 2024-06-16 3/150 2024-06-16 15:38 by 我是王小帅
[基金申请] 希望今年自己国自然面上项目和老婆青年项目能中! +7 恐龙爸爸 2024-06-14 7/350 2024-06-16 14:48 by redfish105
[找工作] 初始合伙人来啦!(生物试剂耗材标准品) +7 欢快的小科研人 2024-06-15 12/600 2024-06-16 14:11 by 水水水中游
[找工作] 杭电、天津科技、青农和宁波工程学院如何选? +11 味道很好啊 2024-06-13 21/1050 2024-06-16 13:57 by wanglongzh
[论文投稿] 二审返修送审10天了,原来一审的3个审稿人只有2个接受了审稿,会邀请新审稿人么? 50+3 huanpo116 2024-06-15 5/250 2024-06-16 10:27 by bobvan
[考博] 2025考博 +5 自强不息a?a 2024-06-15 7/350 2024-06-16 10:07 by wang333666
[硕博家园] 硕博巨婴,也许才刚刚开始 +30 SNaiL1995 2024-06-12 72/3600 2024-06-16 08:34 by 小龙虾biubiubiu
[考博] 34岁读博士晚吗 +26 emitdne 2024-06-13 26/1300 2024-06-16 07:16 by liyeqik
[文学芳草园] 累并快乐着 +13 MYHLD521 2024-06-14 13/650 2024-06-15 22:59 by zeolitess
[基金申请] 关于博后基金的bug问题 +6 lxr1991 2024-06-14 9/450 2024-06-15 21:17 by since—2010
[基金申请] 为什么我的博后基金还在流动站审核中?不会是学院给我卡了吧? +14 王凯12 2024-06-13 26/1300 2024-06-15 15:22 by 好人与坏人
[论文投稿] 求机械类四区sci推荐 5+3 迷茫小旷 2024-06-14 4/200 2024-06-15 11:25 by bobvan
[基金申请] 有没有机械的前辈分享一下评上海优都是什么成果啊 +7 wulala800 2024-06-10 7/350 2024-06-15 09:33 by 晓目崇
[基金申请] 博后基金,以往的结果点不开,怎么回事呢?最后一次机会了,两次都没中前面。 +7 kyukitu 2024-06-14 13/650 2024-06-15 06:46 by 我是王小帅
[食品] 食品博士导师 +6 小李醒yy 2024-06-11 9/450 2024-06-14 23:37 by 小李醒yy
[论文投稿] 最近写了一篇控制优化领域的文章,可以投哪里啊?有没有水一些的期刊推荐 +7 香瓜木香 2024-06-12 13/650 2024-06-14 07:05 by 香瓜木香
[论文投稿] 投稿后发现其他作者的邮箱填错了该怎么办呀 10+4 在飞的猪 2024-06-13 6/300 2024-06-14 04:45 by 小虫子咔咔
[基金申请] 博士后面上项目状态还是专家评审吗 10+9 Thatcheremu 2024-06-13 55/2750 2024-06-13 21:23 by 乌合麒麟
[论文投稿] with editor日期变更 +3 慎独的小花卷 2024-06-12 8/400 2024-06-13 11:00 by 慎独的小花卷
[教师之家] 公办双非,学生论文升学就业都不行。一本大学的论文升学就业没问题吧? +5 河西夜郎 2024-06-09 5/250 2024-06-10 17:59 by yyallen2003
信息提示
请填处理意见