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windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 史前五百年 at 2013-07-26 13:14:23
第一:你做PCR实验室做阳性对照么?没有的话最有可能的是退火温度的问题。
第二:阴性对照打错了,是阳性对照,TAKARA 上面的pMD18-T Vector 的说明书里面有介绍。
第三:可以挑些蓝色的点进行菌液PCR....

阳性对照做了的,有白斑,白斑很多,蓝斑几乎没有,PCR没有做过阳性对照,只做过阴性对照。谢谢,会挑点蓝斑试试的
11楼2013-07-26 15:45:15
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hyphen007

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢,会再优化下PCR条件 2013-07-27 10:27:15
不可能空载体,空载体是蓝班,一定是PCR的问题,比如引物,退火温度,以及PCR参数等
12楼2013-07-26 21:43:01
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,准备提质粒试试 2013-07-27 10:27:35
1.没有对照无法说明
2.我们一般都是先挑许多白斑和一个蓝斑作对照,然后用碱性裂解法提质粒,条带高的有可能是连接成功的,然后再将有可能连接成功的做菌液PCR和酶切。因为菌液PCR会出现假阳性,无法完全证明是否连接成功,最好是做酶切验证,比较靠谱
13楼2013-07-27 10:22:00
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