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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 史前五百年 at 2013-07-26 13:14:23
第一：你做PCR实验室做阳性对照么？没有的话最有可能的是退火温度的问题。
第二：阴性对照打错了，是阳性对照，TAKARA 上面的pMD18-T Vector 的说明书里面有介绍。
第三：可以挑些蓝色的点进行菌液PCR....

阳性对照做了的，有白斑，白斑很多，蓝斑几乎没有，PCR没有做过阳性对照，只做过阴性对照。谢谢，会挑点蓝斑试试的
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11楼2013-07-26 15:45:15
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢，会再优化下PCR条件 2013-07-27 10:27:15
不可能空载体，空载体是蓝班，一定是PCR的问题，比如引物，退火温度，以及PCR参数等
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12楼2013-07-26 21:43:01
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，准备提质粒试试 2013-07-27 10:27:35
1.没有对照无法说明
2.我们一般都是先挑许多白斑和一个蓝斑作对照，然后用碱性裂解法提质粒，条带高的有可能是连接成功的，然后再将有可能连接成功的做菌液PCR和酶切。因为菌液PCR会出现假阳性，无法完全证明是否连接成功，最好是做酶切验证，比较靠谱
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13楼2013-07-27 10:22:00
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