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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带

如题，最近在做蓝白斑筛选，目的条带是原来PCR产物切胶回收的，用的是宝生物的PMD18-T载体，感受态是自己实验室制的，在平板上过夜培养后有蓝斑也有白斑，挑取白斑菌落，在PCR反应体系中蘸一蘸进行菌落PCR，但是电泳结果没有条带，请问各位虫友是载体自连了吗？多板均有蓝斑白斑，都是载体自连吗？
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1楼 2013-07-26 09:06:56
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，准备提质粒试试 2013-07-27 10:27:35
1.没有对照无法说明
2.我们一般都是先挑许多白斑和一个蓝斑作对照，然后用碱性裂解法提质粒，条带高的有可能是连接成功的，然后再将有可能连接成功的做菌液PCR和酶切。因为菌液PCR会出现假阳性，无法完全证明是否连接成功，最好是做酶切验证，比较靠谱
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13楼2013-07-27 10:22:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-26 12:54:56
你确定菌落PCR的体系没有问题吗？做菌落PCR时是否做了正负对照？
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2楼2013-07-26 09:51:10
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史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-26 12:56:26
做个阴性对照平板就知道了。
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3楼2013-07-26 10:02:06
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 09:51:10
你确定菌落PCR的体系没有问题吗？做菌落PCR时是否做了正负对照？

没有做对照，请问正负对照是什么意思呢？
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5楼2013-07-26 12:16:43
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