24小时热门版块排行榜    

查看: 4274  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带

如题,最近在做蓝白斑筛选,目的条带是原来PCR产物切胶回收的,用的是宝生物的PMD18-T载体,感受态是自己实验室制的,在平板上过夜培养后有蓝斑也有白斑,挑取白斑菌落,在PCR反应体系中蘸一蘸进行菌落PCR,但是电泳结果没有条带,请问各位虫友是载体自连了吗?多板均有蓝斑白斑,都是载体自连吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,准备提质粒试试 2013-07-27 10:27:35
1.没有对照无法说明
2.我们一般都是先挑许多白斑和一个蓝斑作对照,然后用碱性裂解法提质粒,条带高的有可能是连接成功的,然后再将有可能连接成功的做菌液PCR和酶切。因为菌液PCR会出现假阳性,无法完全证明是否连接成功,最好是做酶切验证,比较靠谱
13楼2013-07-27 10:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 12:54:56
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?
2楼2013-07-26 09:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 12:56:26
做个阴性对照平板就知道了。
3楼2013-07-26 10:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 09:51:10
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?

没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?
5楼2013-07-26 12:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见