24小时热门版块排行榜    

查看: 3249  |  回复: 12

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带

如题,最近在做蓝白斑筛选,目的条带是原来PCR产物切胶回收的,用的是宝生物的PMD18-T载体,感受态是自己实验室制的,在平板上过夜培养后有蓝斑也有白斑,挑取白斑菌落,在PCR反应体系中蘸一蘸进行菌落PCR,但是电泳结果没有条带,请问各位虫友是载体自连了吗?多板均有蓝斑白斑,都是载体自连吗?
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

PCR技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 12:54:56
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?
2楼2013-07-26 09:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 12:56:26
做个阴性对照平板就知道了。
3楼2013-07-26 10:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


没对照没真相
4楼2013-07-26 11:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 09:51:10
你确定菌落PCR的体系没有问题吗?做菌落PCR时是否做了正负对照?

没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?
5楼2013-07-26 12:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 史前五百年 at 2013-07-26 10:02:06
做个阴性对照平板就知道了。

阴性对照平板是不加什么?我做的对照是不加载体直接加感受态平板,什么都没有
6楼2013-07-26 12:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biomed_fanyi at 2013-07-26 11:45:29
没对照没真相

请问怎么对照呢?
7楼2013-07-26 12:18:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史前五百年

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
windycui(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:23
windycui: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,准备下周重新做做试试 2013-07-27 10:28:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by windycui at 2013-07-26 12:18:01
阴性对照平板是不加什么?我做的对照是不加载体直接加感受态平板,什么都没有...

第一:你做PCR实验室做阳性对照么?没有的话最有可能的是退火温度的问题。
第二:阴性对照打错了,是阳性对照,TAKARA 上面的pMD18-T Vector 的说明书里面有介绍。
第三:可以挑些蓝色的点进行菌液PCR.
8楼2013-07-26 13:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

denghengning

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-26 17:44:33
一、做一个对照
二、看是否是载体空载了,或许因为连接效率太低,如果有必要,可以多挑几个菌来做一做。
9楼2013-07-26 14:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


windycui(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-26 17:44:43
引用回帖:
5楼: Originally posted by windycui at 2013-07-26 12:16:43
没有做对照,请问正负对照是什么意思呢?...

PCR筛选做对照是常识,因为可能有假阳性。负对照一般就是master mix无模板对照,正对照就是含有载体中有插入已知片段的菌落,就是确定PCR体系没有问题。
10楼2013-07-26 14:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 windycui 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 刚刚收到科研之友邮件 +14 olivermiaoer 2024-06-19 16/800 2024-06-20 08:23 by mattysmu
[基金申请] 江南大学到瑞士招聘,称取消非升即走,改预聘+长聘 +21 babu2015 2024-06-18 22/1100 2024-06-19 23:03 by feng6531
[基金申请] 面青地会评时间??? +5 Axvdvbfs 2024-06-19 5/250 2024-06-19 21:11 by 人民海军
[基金申请] 2024国社科通讯评审 +21 qsd10086 2024-06-13 43/2150 2024-06-19 20:57 by 05111401022
[论文投稿] Scientific Reports二审90天了,催稿也没反应怎么办? +3 智晨君 2024-06-18 6/300 2024-06-19 20:08 by licheng78
[基金申请] F口信息学部拿面上,大概需要什么样的成果 +7 _奋黎_ 2024-06-16 18/900 2024-06-19 20:02 by _奋黎_
[基金申请] 面上博士后 +3 jsqy 2024-06-19 3/150 2024-06-19 17:58 by bxwisdom_886
[基金申请] 基金得中 +4 woaini0218 2024-06-18 4/200 2024-06-19 17:27 by mengzl
[基金申请] Nature 11日发文,中国著名学者们称造假迫不得已 +8 babu2015 2024-06-14 8/400 2024-06-19 15:25 by 风今25
[精细化工] 切削液交流群 +3 SZ吴彦祖 2024-06-17 3/150 2024-06-19 14:31 by herng2021
[论文投稿] ACS AMI 返回审稿意见,一个大修,两个据稿,编辑给的修改重投 +5 智商已更新 2024-06-19 5/250 2024-06-19 12:35 by nono2009
[硕博家园] 博士毕业高校和就业的相关问题 +7 SCITOPPP 2024-06-14 11/550 2024-06-18 07:51 by yinxing1995
[论文投稿] 论文已接收,但发现修改稿传的是旧版该怎么办? +3 zsq54321 2024-06-15 6/300 2024-06-17 19:45 by wjykycg
[论文投稿] 审稿问题:为什么荧光激发波长和紫外吸收波长差的大? 10+5 sdawege 2024-06-14 10/500 2024-06-17 18:54 by HH-探针
[基金申请] 面青地会评时间 +8 tanjydd 2024-06-15 8/400 2024-06-17 17:08 by 小龙虾2008
[论文投稿] 投稿被一个审稿人恶意评审了怎么样? +5 1chen 2024-06-14 7/350 2024-06-15 23:15 by xy66xy
[基金申请] 关于博后基金的bug问题 +6 lxr1991 2024-06-14 9/450 2024-06-15 21:17 by since—2010
[论文投稿] 投了一篇4区的SCI,审稿人一个拒稿,一个小修,编辑给了大修。 +9 安稳22123 2024-06-13 10/500 2024-06-14 23:45 by jurkat.1640
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[基金申请] 博士后面上项目状态还是专家评审吗 10+9 Thatcheremu 2024-06-13 55/2750 2024-06-13 21:23 by 乌合麒麟
信息提示
请填处理意见