应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证，除目的片段外还有一条带，什么原因？
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 3577  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)

[求助] 蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证，除目的片段外还有一条带，什么原因？ 已有3人参与

如题，引物T7/SP6，目的片段大小为450bp。

蓝白斑筛选挑取白色克隆用菌落PCR验证，除目的片段外还有一条带，什么原因？
T7-SP6.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
www------sr-------------
1楼 2014-08-10 09:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader
引用回帖:
3楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-09 21:01:35
T7/SP6是T载体上的通用引物，应该不是引物的问题，我的marker是100bp的marker,最上面是1500，往下以此是1000bp,900bp,800bp……，上面的600-700bp间的带是我的目的片段，下面400-500bp间的带是不该出现的带。...

你不是说你的目的片段大小为450bp吗？
T7/SP6是测序引物吧，所以我怀疑这两个引物是否有可能都是正向（或反向）引物的可能性。
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-10 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
贤愚Libra(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:28:56
虽然不知道你的marker的大小，但感觉你的扩增产物可能不是你的target，也许是些非特异性扩增？特别许多产物大小还不一致？是不是这两个引物配对不是太好还是扩增条件未优化？有无阳性对照？（两个引物不会是同方向的 吧？）
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-10 09:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-10 09:48:46
虽然不知道你的marker的大小，但感觉你的扩增产物可能不是你的target，也许是些非特异性扩增？特别许多产物大小还不一致？是不是这两个引物配对不是太好还是扩增条件未优化？有无阳性对照？（两个引物不会是同方向的 ...

T7/SP6是T载体上的通用引物，应该不是引物的问题，我的marker是100bp的marker,最上面是1500，往下以此是1000bp,900bp,800bp……，上面的600-700bp间的带是我的目的片段，下面400-500bp间的带是不该出现的带。
赞一下 回复此楼
www------sr-------------
3楼2014-08-10 10:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
贤愚Libra(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:29:08
我们也用你这种marker，看上去确实目的条带太弱了，反而700多的条带很亮。不知道你连接的片段多大，是不是连了两个进去？另外，电泳图上半部分很亮，不知道是不是紫外光没照均匀？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-08-10 10:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +42 xaw. 2026-04-11 43/2150 2026-04-15 09:57 by ssssjqrr
[考研] 通信工程求调剂！！！ +4 zlb770521 2026-04-14 4/200 2026-04-14 18:19 by lbsjt
[考研] 085500求调剂材料 +11 易11122 2026-04-09 11/550 2026-04-14 17:59 by lhj2009
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所，有机化学356分找调剂 +12 Nadiums 2026-04-09 13/650 2026-04-14 17:54 by lhj2009
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 332求调剂 +15 蕉蕉123 2026-04-10 15/750 2026-04-13 23:12 by pies112
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线，领导幸灾乐祸，教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 280求调剂 +7 兮兮夜夜 2026-04-09 10/500 2026-04-12 00:33 by 蓝云思雨
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 求调剂，一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 计算机类求调剂，22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭