| 查看: 2184 | 回复: 12 | ||
wang6rrtoy银虫 (小有名气)
|
[求助]
关于TA克隆蓝白斑筛选
|
| 关于TA克隆蓝白斑筛选， 长出来全是白斑，挑了几个菌落PCR，结果P出来了，那PCR产物是我的目的基因吗 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有59人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蓝白斑筛选没有菌落，或者都是白斑，是什么情况
已经有9人回复
- 做克隆挑斑有什么技巧吗？
已经有9人回复
- 蓝白斑筛选没问题，挑白色克隆测序无目的基因序列
已经有9人回复
- 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
已经有31人回复
- 最近做T克隆都是阴性，怎么回事？
已经有14人回复
- 生工Taq+Pfu酶做TA克隆效果
已经有4人回复
- 蓝白斑筛选什么都没长，不是感受态的问题。真诚求助高手解答！
已经有15人回复
- 蓝白斑筛选 菌落成串
已经有15人回复
- 构建克隆载体时出现的问题
已经有11人回复
- 蓝白斑筛选只长白斑
已经有10人回复
- TA克隆为什么长一片啊
已经有18人回复
- 蓝白斑筛选时IPTG，Xgal，Amp的用量
已经有14人回复
- 虫子们有谁做过TA克隆呀？额想知道TA克隆的具体的实验步骤
已经有25人回复
- 关于转化、菌落PCR
已经有8人回复
- 关于酶切验证克隆的一点点小疑问！
已经有5人回复
- 蓝白斑筛选问题
已经有6人回复
- 蓝白斑筛选出现的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选实验原理
已经有7人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有9人回复
- 【求助/交流】TA克隆为什么会长出蓝斑
已经有4人回复
- 【求助/交流】大家做TA克隆、蓝白斑筛选用什么样的感受态细胞？
已经有20人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有8人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长
已经有16人回复
yimingwang
金虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 566.5
- 红花: 6
- 帖子: 142
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1192378
- 注册: 2011-01-19
- 性别: GG
- 专业: 植物保护生物技术
2楼2013-08-19 16:45:13
3楼2013-08-19 16:52:17
lijianfu12
银虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 3019.5
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 333
- 在线: 316.6小时
- 虫号: 1992183
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 植物生理与生化
4楼2013-08-19 17:25:28
翰章
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1916.5
- 散金: 240
- 帖子: 72
- 在线: 85.3小时
- 虫号: 1346181
- 注册: 2011-07-15
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
5楼2013-08-19 22:01:05
Sthunder
木虫 (正式写手)
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2013-08-19 23:25:59
wang6rrtoy
银虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 188.9
- 散金: 669
- 红花: 1
- 帖子: 182
- 在线: 99.3小时
- 虫号: 2084288
- 注册: 2012-10-24
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
7楼2013-08-19 23:51:36
Sthunder
木虫 (正式写手)
- 应助: 130 (高中生)
- 金币: 2337.8
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 308
- 在线: 176.6小时
- 虫号: 2551016
- 注册: 2013-07-17
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-20 18:30:53
wang6rrtoy: 金币+5, ★有帮助 2013-08-21 16:11:11
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-20 18:30:53
wang6rrtoy: 金币+5, ★有帮助 2013-08-21 16:11:11
|
提取质粒，然后用你正反引物上设计的酶切位点（也可以用T载体上本身的位点，但要注意你目的序列中是否存在选用的位点），进行酶切就好。一般验证酶切做10微升体系就ok，如果跑胶你PCR和酶切都为阳性那么就没问题了。Good luck！ PS：验证酶切体系（我一般做的时候都是用1 ml菌液提取质粒，然后将其溶解于30-40微升的TE中，测浓度比较麻烦，所以我都是直接取5微升进行酶切） 酶1 0.25 微升 酶2 0.25微升 buffer 1 微升 质粒 5 微升 H2O to 10 微升 |
8楼2013-08-20 00:04:06
9楼2013-08-20 16:38:14
堍仔
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 21 (小学生)
- 贵宾: 1.041
- 金币: 14115.7
- 散金: 11786
- 红花: 336
- 沙发: 82
- 帖子: 16139
- 在线: 645小时
- 虫号: 1453072
- 注册: 2011-10-20
- 性别: MM
- 专业: 动物资源与保护
用自己引物P下，然后再用克隆的引物P下，如果都出来就送测序 10楼2013-08-20 18:27:40
50