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wang6rrtoy银虫 (小有名气)
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关于TA克隆蓝白斑筛选
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| 关于TA克隆蓝白斑筛选， 长出来全是白斑，挑了几个菌落PCR，结果P出来了，那PCR产物是我的目的基因吗 |
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yimingwang
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-20 18:30:53
wang6rrtoy: 金币+5, ★有帮助 2013-08-21 16:11:11
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wang6rrtoy: 金币+5, ★有帮助 2013-08-21 16:11:11
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提取质粒，然后用你正反引物上设计的酶切位点（也可以用T载体上本身的位点，但要注意你目的序列中是否存在选用的位点），进行酶切就好。一般验证酶切做10微升体系就ok，如果跑胶你PCR和酶切都为阳性那么就没问题了。Good luck！ PS：验证酶切体系（我一般做的时候都是用1 ml菌液提取质粒，然后将其溶解于30-40微升的TE中，测浓度比较麻烦，所以我都是直接取5微升进行酶切） 酶1 0.25 微升 酶2 0.25微升 buffer 1 微升 质粒 5 微升 H2O to 10 微升 |
8楼2013-08-20 00:04:06
9楼2013-08-20 16:38:14
堍仔
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用自己引物P下，然后再用克隆的引物P下，如果都出来就送测序 10楼2013-08-20 18:27:40