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wang6rrtoy

银虫 (小有名气)

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[求助] 关于TA克隆蓝白斑筛选

关于TA克隆蓝白斑筛选，长出来全是白斑，挑了几个菌落PCR，结果P出来了，那PCR产物是我的目的基因吗

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好好学习

1楼 2013-08-19 16:31:13

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Sthunder

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-20 18:30:53
wang6rrtoy: 金币+5, ★有帮助 2013-08-21 16:11:11

引用回帖:

7楼: Originally posted by wang6rrtoy at 2013-08-19 23:51:36
请教你一下，酶切如何做呢，能告知一下具体步骤吗...

提取质粒，然后用你正反引物上设计的酶切位点（也可以用T载体上本身的位点，但要注意你目的序列中是否存在选用的位点），进行酶切就好。一般验证酶切做10微升体系就ok，如果跑胶你PCR和酶切都为阳性那么就没问题了。Good luck！
PS：验证酶切体系（我一般做的时候都是用1 ml菌液提取质粒，然后将其溶解于30-40微升的TE中，测浓度比较麻烦，所以我都是直接取5微升进行酶切）
酶1    0.25 微升
酶2 0.25微升
buffer  1 微升
质粒 5 微升
H2O  to 10 微升