| 查看: 7035 | 回复: 36 | |||
[求助]
双酶切总是切不开。。。有没有人用过NEB的NotI这个酶？已有10人参与
|
|||
|
各位同学 我这两个礼拜一只在用NOtI和sfiI这两个酶双酶切载体，但是一直都切不太出来。为了找出是哪个酶的问题，我是这样做的： 在一号管中加入酶切体系和NOTI酶，37度7个小时，电泳检测，发现酶切后的带和未酶切的带大小相同。说明酶切不成功。 在二号管中加入酶切体系和sfiI酶，50度过夜。电泳检测，酶切后的带比未酶切的带迁移的慢，说明已经成功切开了。 切片段的时候，是在以上同样的条件下（notI酶37度7个小时，再加sfiI酶50度过夜），电泳检测是正确的。 注：这两个酶用的都是NEB的，所用的buffer是一样的，都是一个叫cutsmart的buffer。说明书上写的是notI酶37度酶切15-20分钟，sfiI酶50度酶切15-20分钟。 各位高手知不知道这是怎么回事啊 急求帮助啊 这个NOTI贼贵贼贵的，用不起了！！！！！！！！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有175人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
fermentas双酶切体系
已经有5人回复- Takara的BamHI和XhoI双酶切求助
已经有6人回复
- 关于酶切位点ClaⅠ和NotⅠ的双酶切要怎么做？
已经有10人回复
- 关于双酶切的酶的失活问题
已经有6人回复
- 双酶切问题，跪求指导啊
已经有5人回复
- Sac1和Xho1的双酶切连接
已经有5人回复
- 双酶切buffer加多了
已经有6人回复
- 关于双酶切作用时间
已经有10人回复
- SaII和BamHI双酶切切不开
已经有18人回复
- t载体酶切问题
已经有15人回复
- 为什么单酶切切不开
已经有9人回复
- 关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！ 新手，求帮忙！！
已经有4人回复
- 有关NEB内切酶NdeI和XhoI的双酶切问题
已经有6人回复
- 双酶切后目的条带很淡，回收不到
已经有15人回复
- 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！
已经有17人回复
- 质粒酶切切不动，质粒在宿主中繁衍酶切位点会突变么？
已经有8人回复
- Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
已经有13人回复
- NEB 的双酶切软件 活性中出现EcorI,什么意思
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切载体总是切不完全
已经有11人回复
- 【求助/交流】双酶切求助
已经有19人回复
- 【求助/交流】请教NEB的pmeI的酶切体系
已经有7人回复
- 求双酶切，分步酶切的具体操作步骤
已经有7人回复
4楼2014-06-20 15:50:08
曾文正公
金虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4564.3
- 红花: 6
- 帖子: 1936
- 在线: 626.5小时
- 虫号: 2161228
- 注册: 2012-12-02
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
7楼2014-06-20 20:55:42
曾文正公
金虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4564.3
- 红花: 6
- 帖子: 1936
- 在线: 626.5小时
- 虫号: 2161228
- 注册: 2012-12-02
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
26楼2014-06-22 12:09:33
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-06-20 15:30:51
3楼2014-06-20 15:36:43
5楼2014-06-20 16:10:51
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2014-06-20 20:08:58
syx1983
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1690.7
- 散金: 138
- 红花: 2
- 帖子: 333
- 在线: 679.2小时
- 虫号: 693147
- 注册: 2009-01-15
- 性别: GG
- 专业: 高分子组装与超分子结构
8楼2014-06-20 21:21:44
9楼2014-06-20 21:52:18
10楼2014-06-20 21:52:50