| 查看: 7143 | 回复: 6 | |||
shuiniu87987银虫 (小有名气)
|
[求助]
Takara的BamHI和XhoI双酶切求助 已有2人参与
|
| 最近酶切连接转化后一直没菌落，请大家看看问题出在哪？ 50微升双酶切体系：通用buffer 是10乘K buffer 5微升，BamHI和XhoI各加2.5微升，质粒2微克，加水至50微升。然后37度2小时，30度两小时，结束。请问大家Buffer是不是加少了，还是Takara的酶效率不高，需要延长酶切时间？酶切跑电泳条带后的质粒和目的片段条带均清晰。连接用的Takara的T4连接酶，16度连接10h，25微升体系，摩尔比是1:6，说明书要求分别是0.3pmol和0.03pmol，转化为质量大概是200ng（目的片段）和100ng（质粒），我只加了80ng（目的片段）和50ng（质粒），请问这会影响吗？培养基和感受态均做过对照，没问题。谢谢回答。 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有152人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 各位前辈，小虫重组质粒双酶切琼脂糖电泳，没有条带，请求帮助.....
已经有3人回复
- 关于双酶切的酶的失活问题
已经有6人回复
- XhoI和NcoI双酶切之后连接转化不长克隆
已经有22人回复
- pMD19-T双酶切，目的片段上酶切位点和载体上一样
已经有7人回复
- 双酶切问题，跪求指导啊
已经有5人回复
- XhoI和BamHI双酶切问题
已经有16人回复
- SacI和XhoI两个酶位点会自连吗
已经有8人回复
- 关于双酶切作用时间
已经有10人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- SaII和BamHI双酶切切不开
已经有18人回复
- 有关NEB内切酶NdeI和XhoI的双酶切问题
已经有6人回复
- 关于XhoI和SacI双酶切的问题
已经有8人回复
- 关于分步双酶切
已经有7人回复
- Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
已经有13人回复
- NEB 的双酶切软件 活性中出现EcorI,什么意思
已经有6人回复
- 求助：关于BamHI SalI 双酶切的问题
已经有16人回复
- 双酶切体系是什么意思
已经有7人回复
- 【求助/交流】双酶切载体总是切不完全
已经有11人回复
- 【求助/交流】双酶切求助
已经有19人回复
- 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？
已经有17人回复
- 【求助/交流】双酶切的问题哦
已经有18人回复
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8056.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
2楼2014-05-08 22:52:56
junnavme2014
金虫 (正式写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 1091.7
- 散金: 319
- 红花: 4
- 帖子: 829
- 在线: 75.8小时
- 虫号: 2795624
- 注册: 2013-11-12
- 专业: 系统生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shuiniu87987: 金币+5, ★有帮助 2014-05-09 08:46:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-31 16:28:44
感谢参与，应助指数 +1
shuiniu87987: 金币+5, ★有帮助 2014-05-09 08:46:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-31 16:28:44
|
连接用的Takara的T4连接酶，16度连接10h，25微升体系，摩尔比是1:6，说明书要求分别是0.3pmol和0.03pmol，转化为质量大概是200ng（目的片段）和100ng（质粒），我只加了80ng（目的片段）和50ng（质粒），请问这会影响吗？ 为什么不用Takara出的连接试剂盒呢，就比单买连接酶贵50块吧，但效果是完全不一样的。 |
3楼2014-05-08 23:20:26
shuiniu87987
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 268.8
- 红花: 1
- 帖子: 62
- 在线: 66.4小时
- 虫号: 1279587
- 注册: 2011-04-27
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
4楼2014-05-09 08:44:59
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8056.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
5楼2014-05-09 09:07:48
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2014-05-10 18:11:23
shuiniu87987
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 268.8
- 红花: 1
- 帖子: 62
- 在线: 66.4小时
- 虫号: 1279587
- 注册: 2011-04-27
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
7楼2014-05-10 19:47:23
