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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SacI和XhoI两个酶位点会自连吗
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33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] SacI和XhoI两个酶位点会自连吗 已有8人参与

最近在用SacI和XhoI做双酶切连接，SacI的酶切位点为（GAGCT|C），XhoI位点为（C|TCGAG）, 顺序是相反的 ，但是产生相同的粘性末端 ， 请问大家双酶切连接时这两个酶切位点会自连吗？ ？有人说会自连  有人说不会  可是我觉得应该不会自连 因为我做的酶切后的载体当对照 根本就不长单菌落  所以在此求正解！！！！好心人帮帮忙呐！！！
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1楼 2013-09-04 19:35:52
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-05 09:20:56
不会自连，这是同尾酶表，请查看
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  • 附件 1 : 同尾酶表.doc
    • 2013-09-04 21:20:03, 236.5 K
星陈代谢
2楼2013-09-04 21:20:08
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果在同一载体上绝对不会自连         
             SacI                         XhoI
        5'GAGCT-------------------TCGAG  3'
        3'C        -------------------        C   5'
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-09-04 21:50:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不会。两个3’突出的末端不能相连。
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4楼2013-09-05 01:42:39
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fuding6

木虫 (小有名气)
★
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应该不会吧，否则载体上设计这两个多克隆位点就没意义了。
SacI/XhoI双切后目的序列应该如下：
   5’  H2PO3-C-目的单列-C-OH 3’
3’  HO-TCGAG-互补单列-GAGCT-H2PO3 5’
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5楼2013-09-05 09:29:39
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
★
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经思考，自连事件也有可能发生

[ Last edited by 2008101111 on 2013-9-5 at 10:51 ]
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自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-09-05 10:37:16
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我认为可能会自连接，主要有碱基互补配对就会有自连接，缺口不一定完全能够契合也会有自连接发生。
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7楼2013-09-05 11:33:15
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fdjzhang

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
SalI和XhoI是同尾酶，会自连，这2个不会
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8楼2013-09-05 17:15:48
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cr507

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
DNA是双螺旋结构，楼主用立体的思维想想，显然应该能自连的。平板没有长菌落可能是其他原因造成（建议缩短酶切时间），并不能证明载体不自连。
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9楼2013-09-05 19:04:37
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