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关于一个载体pGZRS-38的XbaI&SacI双酶切的问题
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大家好，现遇到这样一个问题：载体pGZRS-38用Fermentas 快速内切酶XbaI&SacI双酶切总是感觉切不开，酶切完后还是有三条带，但中间一条会亮一些，也曾做过分别单酶切，电泳结果类似。也曾对该载体的多克隆位点测序，来自pUC-18，测序结果正确。回收双酶切的中间的亮带，连接后长出的都是些空载菌，而且不知为啥酶切后电泳观察感觉质粒损失很严重，回收的效率非常低。因为XbaI的作用受甲基化影响，所以也购买了全式金去甲基化的E. coli感受态，重新转化质粒，提取质粒，该问题也未得到改善。拜托各位帮我分析一下是什么原因！非常感谢！ pGZRS-38 Xbal&SacI双酶切，Marker为DL5000 |
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susizheng
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