应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » XhoI和BamHI双酶切问题
171/2返回列表12下一页
查看: 5898  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1049131934

铜虫 (小有名气)

[求助] XhoI和BamHI双酶切问题 已有1人参与

本人用的质粒是pET-28a，限制性酶XhoI和BamHI两个酶进行酶切连接目的基因，目的基因连接上了，但是在进行双酶切检测时，出现了一个比目的基因大，比质粒小的条带，有没有人明白这是怎么回事儿？

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:54 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-23 21:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 16:15:46
如果酶切不能确定菌液的阳性，可以进行菌液PCR鉴定，如果PCR有阳性结果，直接送测序就OK了，祝成功
赞一下(2人) 回复此楼
自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-09-26 17:50:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1049131934

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-12-05 01:44:12
过夜37？好吧。我知道是可以的。不过一般过夜我们都是4度的。37就4个小时。...

好吧，谢谢，我是两个基因同时重组进质粒，我已经利用三酶切体系成功了
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2013-12-07 16:32:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 16:15:29
跑质粒对照了吗？会不会是酶切不完全的质粒？
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-23 22:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-26 20:42:10
以载体质粒双酶切为对照，看是否能切出一条相同大小的条带，再比对目的片段大小。酶切时适当时间长一点，保证酶切充分，便于分析。
赞一下 回复此楼
做自己
3楼2013-09-24 11:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-26 20:42:16
1.考虑是否酶切不完全，可适当延长酶切时间；2.考虑是否质粒浓度太高，适当减少质粒用量；3.考虑双酶切所用的buffer是否为此2种酶的通用buffer？
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-24 11:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Da果冻

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也出现了相同的问题，我测序也没测出来，你测个序看看是不是连上你的目的条带了
赞一下 回复此楼
一个人的存在
5楼2013-09-24 15:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 16:15:57
连接啥可能都有，所以多弄几个克隆进行验证
PCR验证最好是载体片段上引物序列
酶切验证也可以选择载体上的酶切位点来验证
最后一定测序验证
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-27 03:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biology-boy

禁虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 16:16:05
本帖内容被屏蔽
8楼2013-09-27 13:04:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-27 16:16:12
酶切的过程很重要。请问你切了多久？，温度和puffer呢？据我所知，酶切用的酶在长时间和buffer有问题的时候会产生其他切口。就是酶切出其他的特定序列。你可以百度下酶切的星号活性
赞一下 回复此楼
应助之星就是我~没错。你没有看错~
9楼2013-09-27 14:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 11:51:46
首先，在酶切鉴定之前先做一次菌液PCR，如果结果呈阳性，再进行酶切。
其次，认真检查一下你用的质粒上面是不是不止一个XhoI或BamHI酶切位点。
最后，看看你XhoI和BamHI两种酶的公用Buffer是不是合适，两种酶在这种公用Buffer里面的活性怎样。
赞一下 回复此楼
我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
10楼2013-10-08 11:59:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 1049131934 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 295求调剂 +3 桂秋二十八 2026-04-05 5/250 2026-04-11 11:36 by zhq0425
[考研] 269电子信息求调剂，可转专业 +11 独酌wl 2026-04-06 11/550 2026-04-11 11:12 by 逆水乘风
[考研] 还有化工二轮调剂的学校吗 5+14 化工人999 2026-04-09 48/2400 2026-04-11 10:27 by 89436494
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +17 梁富贵险中求 2026-04-04 19/950 2026-04-11 00:29 by wangjihu
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +6 祁柒连 2026-04-06 6/300 2026-04-10 11:10 by Roomoo
[考研] 一志愿中南大学物理学，英一66，求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 297求调剂 +27 GENJIOW 2026-04-07 30/1500 2026-04-09 23:20 by wolf97
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 283求调剂 +19 A child 2026-04-04 19/950 2026-04-08 14:26 by xingguangj
[考研] 求调剂 +28 111623 2026-04-04 33/1650 2026-04-08 09:24 by 泽润东方
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 生物学学硕求调剂：351分一志愿南京师范大学生物学专业 +6 …～、王…～ 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:54 by macy2011
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +8 相信必会光芒万� 2026-04-05 10/500 2026-04-05 12:19 by Hdyxbekcb
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭