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heimei0211

金虫 (小有名气)


[交流] 双酶切buffer加多了

双酶切的时候,一走神,buffer多加了一倍,有什么影响吗?
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stevenshi021

新虫 (小有名气)


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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-04 12:38:39
heimei0211: 金币+1 2013-06-04 17:01:44
会影响酶切效率的,最简单的做法就是加水稀释一下就可以了,达到最终1X。
2楼2013-06-04 09:58:45
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heimei0211

金虫 (小有名气)


1949stone: 最好的结果啦 2013-06-05 08:16:16
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-04 09:58:45
会影响酶切效率的,最简单的做法就是加水稀释一下就可以了,达到最终1X。

我直接没稀释,现在出来结果,没什么影响
3楼2013-06-04 17:01:23
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m_marion

新虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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1949stone: 金币+2, 还好吧 2013-06-05 08:16:59
heimei0211: 金币+4 2013-06-05 08:19:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by heimei0211 at 2013-06-04 17:01:23
我直接没稀释,现在出来结果,没什么影响...

通用buffer一般是没什么影响,buffer浓度越高、盐浓度越高、酶的活性越低,所以有* activity的酶就是靠高盐浓度来抑制* activity,然后Fermentas干脆在许多地方直接推荐用2X浓度的Tango buffer,既可以抑制* activity又可以保证别的酶还能工作(虽然活性降低)。

不过Fermentas应该是图省事才尽量让大家“能用2X Tango buffer”就用2X,别家的酶没有这么玩的——Takara、NEB、Promega

[ Last edited by m_marion on 2013-6-4 at 17:06 ]
4楼2013-06-04 17:05:14
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fuding6

木虫 (小有名气)


没多大影响的。
5楼2013-06-05 08:07:46
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heimei0211

金虫 (小有名气)


如果双酶切的话,是不同公司的酶,那一般是选择Fermentas的Buffer?
6楼2013-06-05 08:25:55
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m_marion

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by heimei0211 at 2013-06-05 08:25:55
如果双酶切的话,是不同公司的酶,那一般是选择Fermentas的Buffer?

我们实验室也是四家的酶都有,酶么——同样的酶同样的甘油,互相替代没有问题,只是不要把条件不同的同切酶混淆了。而buffer我统一用Fermentas的buffer系统,有比较小资的师弟师妹选贵的用(NEB),我是觉得NEB的buffer还要额外加BSA太麻烦了所以不用。
7楼2013-06-05 12:58:21
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