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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切buffer加多了
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heimei0211

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切buffer加多了

双酶切的时候，一走神，buffer多加了一倍，有什么影响吗？
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1楼 2013-06-04 09:41:09
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-04 12:38:39
heimei0211: 金币+1 2013-06-04 17:01:44
会影响酶切效率的，最简单的做法就是加水稀释一下就可以了，达到最终1X。
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2楼2013-06-04 09:58:45
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heimei0211

金虫 (小有名气)
1949stone: 最好的结果啦 2013-06-05 08:16:16
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-06-04 09:58:45
会影响酶切效率的，最简单的做法就是加水稀释一下就可以了，达到最终1X。

我直接没稀释，现在出来结果，没什么影响
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3楼2013-06-04 17:01:23
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m_marion

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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1949stone: 金币+2, 还好吧 2013-06-05 08:16:59
heimei0211: 金币+4 2013-06-05 08:19:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by heimei0211 at 2013-06-04 17:01:23
我直接没稀释，现在出来结果，没什么影响...

通用buffer一般是没什么影响，buffer浓度越高、盐浓度越高、酶的活性越低，所以有* activity的酶就是靠高盐浓度来抑制* activity，然后Fermentas干脆在许多地方直接推荐用2X浓度的Tango buffer，既可以抑制* activity又可以保证别的酶还能工作（虽然活性降低）。

不过Fermentas应该是图省事才尽量让大家“能用2X Tango buffer”就用2X，别家的酶没有这么玩的——Takara、NEB、Promega

[ Last edited by m_marion on 2013-6-4 at 17:06 ]
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4楼2013-06-04 17:05:14
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fuding6

木虫 (小有名气)
没多大影响的。
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5楼2013-06-05 08:07:46
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heimei0211

金虫 (小有名气)
如果双酶切的话，是不同公司的酶，那一般是选择Fermentas的Buffer?
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6楼2013-06-05 08:25:55
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m_marion

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by heimei0211 at 2013-06-05 08:25:55
如果双酶切的话，是不同公司的酶，那一般是选择Fermentas的Buffer?

我们实验室也是四家的酶都有，酶么——同样的酶同样的甘油，互相替代没有问题，只是不要把条件不同的同切酶混淆了。而buffer我统一用Fermentas的buffer系统，有比较小资的师弟师妹选贵的用（NEB），我是觉得NEB的buffer还要额外加BSA太麻烦了所以不用。
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7楼2013-06-05 12:58:21
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