应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于双酶切作用时间
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 3058  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

不懂sophia

木虫 (初入文坛)

[求助] 关于双酶切作用时间

我要用BamHⅠ和 SphⅠ做双酶切，切质粒和PCR产物，请问80微升体系的加酶量是多少？需要作用多长时间？我试过两种酶各加2微升，处理8小时，但是还是没有切完全，请问是适当增加酶量还是延长酶切时间呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-16 22:34:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:03
gyesang: 回帖置顶 2013-05-19 18:18:06
有个2楼搞什么不懂不要瞎说，10ul体系加入2ul酶已经20%的体系了，最终体系中含有的甘油10%严重影响酶切效果，一般酶切所加酶量是根据你的DNA量确定的，每种酶都有说明，1u在1h内可以酶切多少质粒DNA或基因组DNA，所以酶量与你的体系没有太大关系，大体系酶切的好处是可以降低你DNA中的杂质以及乙醇对酶的影响（稀释作用），如果你的酶8h还没有切开，这时候你需要考虑的是你DNA的问题，而不是酶切问题。一般所有的酶在1h内都可以切开质粒DNA.酶切翻译不是加入的酶越多越好，有时候恰恰相反。
祝好
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2013-05-17 10:37:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

光树林

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:45:46
我一般10ul加入2ul的酶，楼主可以试试加入10ul 的酶。。。不过建议楼主缩小反应体系，50ul试试看，酶切8小时应该是足够的。还有你用的缓冲液是否对两种酶都适用
赞一下 回复此楼
一路向北
2楼2013-05-16 23:03:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
有些酶就是很难反应完全，割胶/去磷酸化接着做好了。
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-16 23:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:45:54
这两个酶都挺好用的呀。酶的作用效果与底物的量有关，我一般是1μg质粒加10-15U(不是μl，是酶活单位)，切2-3小时。你的80μl酶切体系里加了多少μg质粒？此外，如果底物浓度太高也有可能造成酶切效果不好。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-17 08:44:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:11
我们一般都是4度过夜。绝对切得完全。如果你质粒切的不完全的话，你可以切完后再跑胶回收啊。我们一般是50ul的体系里面各加2ul的酶，30ul的DNA。
赞一下 回复此楼
keepon
6楼2013-05-17 14:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

microblue

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 大体系
2. 过夜酶切
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-19 11:17:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterstill

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
不懂sophia(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-19 18:18:21
切不好，和你DNA的质量，酶的质量都可能有关系；

DNA的质量：一定要减少杂质，简单点就是重新跑胶、切胶、回收，用pH8.0的Tri溶液（注意不是TE）溶解；

如果确定DNA没问题，那就换新酶，就是说有可能原来的酶被杂质污染了，失效！
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-19 14:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterstill

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
不懂sophia(gyesang代发): 金币+1, 适中最重要 2013-05-19 18:18:41
酶量不要增加了，时间也不可以太长，否则会切过头！
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-19 14:36:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑饮江湖水

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 光树林 at 2013-05-16 23:03:13
我一般10ul加入2ul的酶，楼主可以试试加入10ul 的酶。。。不过建议楼主缩小反应体系，50ul试试看，酶切8小时应该是足够的。还有你用的缓冲液是否对两种酶都适用

酶有点多了吧
回复此楼
10楼2014-07-11 17:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 不懂sophia 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +8 水星记infp 2026-04-05 8/400 2026-04-06 06:09 by houyaoxu
[考研] 材料调剂 +6 一样YWY 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:30 by 南航~万老师
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 材料0856 英一数二 323 求调剂 +14 袁sy 2026-04-01 14/700 2026-04-05 18:18 by cql1109
[考研] 304求调剂 +3 luoye0105 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:16 by 土木硕士招生
[考研] 385分 生物学（071000）求调剂 +11 qf626 2026-04-01 11/550 2026-04-05 17:35 by Ecowxq666！
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 求调剂，一志愿郑州大学材料与化工专硕，英二数二342分，求老师收留 +18 v12abo 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 11:37 by a8144223
[考研] 一志愿华南师范361分，化学求调剂 +7 Nicole88888 2026-04-01 7/350 2026-04-04 18:28 by macy2011
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600，349 +11 吃的不少 2026-03-30 11/550 2026-04-03 18:05 by Jimmyandyou
[考研] 初试成绩337找调剂 +3 ??? ?. ? 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:43 by 土木硕士招生
[考研] 326求调剂 +10 崽崽仔 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:08 by 帕尔马拉特
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分，求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
[考研] 350求调剂 +7 阿佳～ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭