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关于双酶切作用时间
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| 我要用BamHⅠ和 SphⅠ做双酶切，切质粒和PCR产物，请问80微升体系的加酶量是多少？需要作用多长时间？我试过两种酶各加2微升，处理8小时，但是还是没有切完全，请问是适当增加酶量还是延长酶切时间呢？ |
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3楼2013-05-16 23:47:58
2楼2013-05-16 23:03:13
cicelyzh
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4楼2013-05-17 08:44:10
stevenshi021
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【答案】应助回帖
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不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:03
gyesang: 回帖置顶 2013-05-19 18:18:06
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gyesang: 回帖置顶 2013-05-19 18:18:06
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有个2楼搞什么不懂不要瞎说，10ul体系加入2ul酶已经20%的体系了，最终体系中含有的甘油10%严重影响酶切效果，一般酶切所加酶量是根据你的DNA量确定的，每种酶都有说明，1u在1h内可以酶切多少质粒DNA或基因组DNA，所以酶量与你的体系没有太大关系，大体系酶切的好处是可以降低你DNA中的杂质以及乙醇对酶的影响（稀释作用），如果你的酶8h还没有切开，这时候你需要考虑的是你DNA的问题，而不是酶切问题。一般所有的酶在1h内都可以切开质粒DNA.酶切翻译不是加入的酶越多越好，有时候恰恰相反。 祝好 |
5楼2013-05-17 10:37:28