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不懂sophia

木虫 (初入文坛)

[求助] 关于双酶切作用时间

我要用BamHⅠ和 SphⅠ做双酶切,切质粒和PCR产物,请问80微升体系的加酶量是多少?需要作用多长时间?我试过两种酶各加2微升,处理8小时,但是还是没有切完全,请问是适当增加酶量还是延长酶切时间呢?
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waterstill

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
不懂sophia(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-19 18:18:21
切不好,和你DNA的质量,酶的质量都可能有关系;

DNA的质量:一定要减少杂质,简单点就是重新跑胶、切胶、回收,用pH8.0的Tri溶液(注意不是TE)溶解;

如果确定DNA没问题,那就换新酶,就是说有可能原来的酶被杂质污染了,失效!
8楼2013-05-19 14:34:11
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waterstill

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


不懂sophia(gyesang代发): 金币+1, 适中最重要 2013-05-19 18:18:41
酶量不要增加了,时间也不可以太长,否则会切过头!
9楼2013-05-19 14:36:39
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