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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切。。。。。。。
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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切。。。。。。。

大家对质粒（不含目的基因）双酶切一般用多少体系，酶的体积为多少，一般会考虑到酶浓度吗？我们实验室有人告诉我可以不考虑酶浓度，用10体系时酶各加0.5微升，dna加5微升（约200ng/5微升），这样可以吗？
另外电泳时酶切样品上样多少呢，5微升可以吗？跑出的条带有些暗，是不是可以增加上样量
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1楼 2012-10-20 12:35:19
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水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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xulu2008: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-10-21 10:17:59
如果只是看酶切效果的话，你上面的条件可以，条带不亮没关系，能够看到，拍照就行，不过你酶切的是10ul剩下的也没有用，可以都上样跑电泳。
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2楼2012-10-20 17:49:37
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切鉴定，20微升就够了，上样量也是20.质粒。载体酶切的话，看你的回收方法，以及质粒的拷贝数决定酶切体系。各种载体不一样的。我20,40,60微升体系都用过。
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3楼2012-10-20 19:22:18
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飞翔的麦穗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒双酶切之后可以都跑电泳，如果酶切后质粒还用的话就在进行胶回收
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珍惜时间，珍惜生命
4楼2012-10-20 23:26:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果只是做鉴定0.5ug质粒酶切也足够了，酶的用量在2-5U切1-2小时足以。如果你需要回收链接什么的，取1-2ug做酶切，酶的用量也要根据各种酶的活力浓度考虑。此外，有些酶可以切长时间，有些就不行，切久了会有星活性。
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5楼2012-10-21 03:10:12
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m10011063

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-20 19:22:18
酶切鉴定，20微升就够了，上样量也是20.质粒。载体酶切的话，看你的回收方法，以及质粒的拷贝数决定酶切体系。各种载体不一样的。我20,40,60微升体系都用过。

楼主您好，我是个新手，我想进行大量的质粒DNA酶切，一般来说最大的量能达到多少？另外，质粒DNA的浓度和酶的浓度之间的关系是什么啊？谢谢楼主~
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6楼2015-11-30 18:41:08
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