24小时热门版块排行榜    

查看: 2178  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切。。。。。。。

大家对质粒(不含目的基因)双酶切一般用多少体系,酶的体积为多少,一般会考虑到酶浓度吗?我们实验室有人告诉我可以不考虑酶浓度,用10体系时酶各加0.5微升,dna加5微升(约200ng/5微升),这样可以吗?
另外电泳时酶切样品上样多少呢,5微升可以吗?跑出的条带有些暗,是不是可以增加上样量
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切鉴定,20微升就够了,上样量也是20.质粒。载体酶切的话,看你的回收方法,以及质粒的拷贝数决定酶切体系。各种载体不一样的。我20,40,60微升体系都用过。
3楼2012-10-20 19:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xulu2008: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-10-21 10:17:59
如果只是看酶切效果的话,你上面的条件可以,条带不亮没关系,能够看到,拍照就行,不过你酶切的是10ul剩下的也没有用,可以都上样跑电泳。
2楼2012-10-20 17:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞翔的麦穗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒双酶切之后可以都跑电泳,如果酶切后质粒还用的话就在进行胶回收
珍惜时间,珍惜生命
4楼2012-10-20 23:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果只是做鉴定0.5ug质粒酶切也足够了,酶的用量在2-5U切1-2小时足以。如果你需要回收链接什么的,取1-2ug做酶切,酶的用量也要根据各种酶的活力浓度考虑。此外,有些酶可以切长时间,有些就不行,切久了会有星活性。
5楼2012-10-21 03:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 4/200 2026-03-16 18:24 by 简之-
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +7 曦熙兮 2026-03-15 7/350 2026-03-16 16:34 by houyaoxu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家,不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 一志愿郑大070303,338分,求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
请填处理意见