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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切。。。。。。。

大家对质粒(不含目的基因)双酶切一般用多少体系,酶的体积为多少,一般会考虑到酶浓度吗?我们实验室有人告诉我可以不考虑酶浓度,用10体系时酶各加0.5微升,dna加5微升(约200ng/5微升),这样可以吗?
另外电泳时酶切样品上样多少呢,5微升可以吗?跑出的条带有些暗,是不是可以增加上样量
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飞翔的麦穗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒双酶切之后可以都跑电泳,如果酶切后质粒还用的话就在进行胶回收
珍惜时间,珍惜生命
4楼2012-10-20 23:26:26
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水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xulu2008: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-10-21 10:17:59
如果只是看酶切效果的话,你上面的条件可以,条带不亮没关系,能够看到,拍照就行,不过你酶切的是10ul剩下的也没有用,可以都上样跑电泳。
2楼2012-10-20 17:49:37
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切鉴定,20微升就够了,上样量也是20.质粒。载体酶切的话,看你的回收方法,以及质粒的拷贝数决定酶切体系。各种载体不一样的。我20,40,60微升体系都用过。
3楼2012-10-20 19:22:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果只是做鉴定0.5ug质粒酶切也足够了,酶的用量在2-5U切1-2小时足以。如果你需要回收链接什么的,取1-2ug做酶切,酶的用量也要根据各种酶的活力浓度考虑。此外,有些酶可以切长时间,有些就不行,切久了会有星活性。
5楼2012-10-21 03:10:12
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