应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒双酶切。。。。。。。
61/1返回列表
查看: 2420  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切。。。。。。。

大家对质粒（不含目的基因）双酶切一般用多少体系，酶的体积为多少，一般会考虑到酶浓度吗？我们实验室有人告诉我可以不考虑酶浓度，用10体系时酶各加0.5微升，dna加5微升（约200ng/5微升），这样可以吗？
另外电泳时酶切样品上样多少呢，5微升可以吗？跑出的条带有些暗，是不是可以增加上样量
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-20 12:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xulu2008: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-10-21 10:17:59
如果只是看酶切效果的话，你上面的条件可以，条带不亮没关系，能够看到，拍照就行，不过你酶切的是10ul剩下的也没有用，可以都上样跑电泳。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-20 17:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切鉴定，20微升就够了，上样量也是20.质粒。载体酶切的话，看你的回收方法，以及质粒的拷贝数决定酶切体系。各种载体不一样的。我20,40,60微升体系都用过。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-20 19:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞翔的麦穗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒双酶切之后可以都跑电泳，如果酶切后质粒还用的话就在进行胶回收
赞一下 回复此楼
珍惜时间，珍惜生命
4楼2012-10-20 23:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果只是做鉴定0.5ug质粒酶切也足够了，酶的用量在2-5U切1-2小时足以。如果你需要回收链接什么的，取1-2ug做酶切，酶的用量也要根据各种酶的活力浓度考虑。此外，有些酶可以切长时间，有些就不行，切久了会有星活性。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-10-21 03:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m10011063

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tulip1213 at 2012-10-20 19:22:18
酶切鉴定，20微升就够了，上样量也是20.质粒。载体酶切的话，看你的回收方法，以及质粒的拷贝数决定酶切体系。各种载体不一样的。我20,40,60微升体系都用过。

楼主您好，我是个新手，我想进行大量的质粒DNA酶切，一般来说最大的量能达到多少？另外，质粒DNA的浓度和酶的浓度之间的关系是什么啊？谢谢楼主~
赞一下 回复此楼
6楼2015-11-30 18:41:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xulu2008 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 68gx6bh3ei 2026-07-09 3/150 2026-07-10 06:53 by pbuc7it0i8
[硕博家园] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 68gx6bh3ei 2026-07-09 3/150 2026-07-10 06:33 by pbuc7it0i8
[硕博家园] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 ph7bxbho8f 2026-07-09 3/150 2026-07-10 05:53 by j4frgf6zcw
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 al9t2f50x3 2026-07-09 4/200 2026-07-10 05:33 by j4frgf6zcw
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 al9t2f50x3 2026-07-09 4/200 2026-07-10 05:33 by j4frgf6zcw
[基金申请] b口会评 +6 当空照 2026-07-08 6/300 2026-07-09 20:49 by tonyliu0401
[基金申请] 信息学部会评时间 +3 xuel2011 2026-07-06 3/150 2026-07-09 19:05 by mollyzhang_2003
[基金申请] 祈祷青基必中 50+3 hadengry 2026-07-09 9/450 2026-07-09 17:37 by 文杰猪猪
[考研] 在职考研 +6 wu5d 2026-07-08 7/350 2026-07-09 16:40 by 化工小霸王呀
[论文投稿] MSER送审了还被拒稿 +3 S778950906 2026-07-08 5/250 2026-07-09 15:46 by S778950906
[基金申请] 关于如何从代码看上不上会 +11 且听虎啸 2026-07-09 14/700 2026-07-09 15:27 by libeny
[有机交流] 硝基还原 20+3 暮年飞雪 2026-07-07 5/250 2026-07-09 13:30 by tfang
[基金申请] 化学口会评？应用基础研究和基础研究，希望能分开 +3 Tide man 2026-07-08 3/150 2026-07-09 11:36 by dede5556
[基金申请] 今年E04面上 +15 布布和一二 2026-07-05 21/1050 2026-07-09 10:25 by 学员fOzRO9
[硕博家园] 大龄残疾硕士的一点执念 +14 3776737374 2026-07-06 22/1100 2026-07-09 06:07 by lovechizi
[基金申请] 生命口会评 +4 wuke100666 2026-07-07 4/200 2026-07-08 16:38 by 逍遥不够自在
[教师之家] 网络举报学术不端成为了男女之间情杀的手段了，真荒唐。。。 +3 zju2000 2026-07-04 3/150 2026-07-07 21:00 by hyx552200
[论文投稿] 刑法学论文投稿求助 +3 高源678 2026-07-04 5/250 2026-07-06 12:20 by 平天尺
[论文投稿] Journal of Environmental Chemical Engineering +3 雪花天涯 2026-07-05 3/150 2026-07-06 09:00 by bobvan
[基金申请] 最后一年，祈求好运 +3 pyw1992 2026-07-06 3/150 2026-07-06 08:53 by 苏_frp
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭