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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » XhoI和BamHI双酶切问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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1049131934

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Da果冻 at 2013-09-24 15:59:58
我也出现了相同的问题，我测序也没测出来，你测个序看看是不是连上你的目的条带了

我那个测序是没有问题，目的条带已经连接上了，应为之前做的空质粒用于重组质粒的比对电泳，重组质粒明显比空质粒大，所以才敢去测序。。。
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11楼2013-12-04 20:44:42
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1049131934

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by biology-boy at 2013-09-27 13:04:57
应该是你的vector上的酶切位点不止两个，可能是其中的一个有两个位点 所以酶切成了三段。

恩，我也是这么认为的，尽管质粒图谱上两种酶都只有一个酶切位点。
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12楼2013-12-04 20:46:13
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1049131934

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-09-27 14:53:16
酶切的过程很重要。请问你切了多久？，温度和puffer呢？据我所知，酶切用的酶在长时间和buffer有问题的时候会产生其他切口。就是酶切出其他的特定序列。你可以百度下酶切的星号活性

酶切过夜，37℃，buffer是可以双酶切的
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13楼2013-12-04 20:47:31
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 1049131934 at 2013-12-04 20:47:31
酶切过夜，37℃，buffer是可以双酶切的...

过夜37？好吧。我知道是可以的。不过一般过夜我们都是4度的。37就4个小时。
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
14楼2013-12-05 01:44:12
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也有可能酶切之后 限制酶仍结合在DNA序列上 导致跑胶条带显示误差
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借你一生好不好
15楼2013-12-05 10:34:17
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1049131934

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-12-05 01:44:12
过夜37？好吧。我知道是可以的。不过一般过夜我们都是4度的。37就4个小时。...

好吧，谢谢，我是两个基因同时重组进质粒，我已经利用三酶切体系成功了
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16楼2013-12-07 16:32:48
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永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有可能，你在选择两个酶切位点的时候，你的目的模板里也含有酶切位点。
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17楼2014-02-17 21:12:18
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