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1049131934

铜虫 (小有名气)

[求助] XhoI和BamHI双酶切问题已有1人参与

本人用的质粒是pET-28a,限制性酶XhoI和BamHI两个酶进行酶切连接目的基因,目的基因连接上了,但是在进行双酶切检测时,出现了一个比目的基因大,比质粒小的条带,有没有人明白这是怎么回事儿?

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:54 ]
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RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-26 20:42:10
以载体质粒双酶切为对照,看是否能切出一条相同大小的条带,再比对目的片段大小。酶切时适当时间长一点,保证酶切充分,便于分析。
做自己
3楼2013-09-24 11:12:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-27 16:15:29
跑质粒对照了吗?会不会是酶切不完全的质粒?
2楼2013-09-23 22:14:15
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shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-26 20:42:16
1.考虑是否酶切不完全,可适当延长酶切时间;2.考虑是否质粒浓度太高,适当减少质粒用量;3.考虑双酶切所用的buffer是否为此2种酶的通用buffer?
4楼2013-09-24 11:46:33
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Da果冻

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也出现了相同的问题,我测序也没测出来,你测个序看看是不是连上你的目的条带了
一个人的存在
5楼2013-09-24 15:59:58
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