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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » NEB 的双酶切软件 活性中出现EcorI,什么意思
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jdjmp3

新虫 (小有名气)

[求助] NEB 的双酶切软件 活性中出现EcorI,什么意思

我要用到SgrAI和SpHi双酶切，可是用NEB双酶切软件发现活性中EcorI50%,还能用这酶么?EcorI50%什么意思？是不是用SgrAI和SpHi双酶切时有50%的几率把EcorI切掉，可我只能用这俩酶怎么办
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    • 2012-04-04 10:59:54, 23.79 K

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1楼 2012-04-04 11:08:06
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-04 22:24:54
NEB公司的公用buffer有五种，buffer 1,2,3,4和EcoRI buffer。
这表示，这两种酶在EcoRIbuffer中有50%的活性。你可以用该buffer进行双酶切。
如果需要计算双酶切时所需的精确酶量以及方便找到最合适的buffer，可以考虑使用Double Degestion Buffer，我曾经在小木虫推荐过，你可以搜搜看。
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2楼2012-04-04 22:09:31
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-04 22:25:07
jdjmp3: 金币+5, 解答的清楚明白，多谢拉 2012-04-05 01:45:27
该软件推荐利用buffer1 或者buffer4.这两种酶在这两种酶中的活性都是100%，你可以考虑尝试用这两种酶，但酶切时间不要太长，主要是防止出现星活性。
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3楼2012-04-04 22:15:36
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jdjmp3

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panda73 at 2012-04-04 22:15:36:
该软件推荐利用buffer1 或者buffer4.这两种酶在这两种酶中的活性都是100%，你可以考虑尝试用这两种酶，但酶切时间不要太长，主要是防止出现星活性。

那SgrAI我加什么 保护性 碱机，见几对照表没有这酶
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4楼2012-04-05 01:47:29
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panda73

金虫 (小有名气)
一般三个碱基就足够了
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5楼2012-04-05 12:50:02
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jdjmp3

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by panda73 at 2012-04-05 12:50:02:
一般三个碱基就足够了

怎么加，家什么，不加行不
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6楼2012-04-05 13:14:43
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191665587

金虫 (初入文坛)
请问下你的SgrAI内切酶是在哪里买的啊？价格如何？我需要用，但是常用的公司订单上貌似没有那种酶
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7楼2016-01-07 20:38:45
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