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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切
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lqs075

银虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切

最近在做双酶切，用的是EcoR 1和Hind 3，请问要怎样才能得到比较好的结果呢？我同时加两种酶和它们相对应的buffer 进去的话，会不会相互影响呢？求各位大师指点
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1楼 2012-03-19 21:35:56
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果使用的是TAKARA的酶，在酶切体系中加1XM就可以了！
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相信自己，一定能成功！
2楼2012-03-19 22:08:47
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lqs075

银虫 (初入文坛)
可以再说得明白些吗？
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3楼2012-03-19 22:57:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-03-20 12:05:58
楼主用的是哪家的酶？试剂公司对于双酶切一般都有推荐使用的缓冲液。譬如NEB的EcoR 1-HF和Hind 3-HF用buffer 4。对于TAKARA的用1XM （见http://www.takara.com.cn/?action ... d=69&subclass=1）。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-03-19 23:16:00
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-20 12:06:18
lqs075: 金币+2, ★有帮助, 好，我去下一个看看 2012-03-20 21:08:06
我推荐过一款专门进行双酶切设计的在线软件，Double digestion designer，，可以自动推荐buffer，还可以精确计算酶切所需的酶量，对新手来说，很方便，你可以试试。http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php
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5楼2012-03-20 08:22:16
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河
建议去NEB的主页，有专门的双酶切软件http://www.neb-china.com/
祝好
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将相本无种★男儿当自强
6楼2012-03-20 09:04:10
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王雨云

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励~ 2012-03-20 12:06:32
Double digestion designer我也用过，两种酶的通用buffer上面有介绍，每种酶在这种buffer里的剩余酶活页也会显示。
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7楼2012-03-20 11:22:19
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jiafeimao21

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这2个酶我用过的，可以一起用。

按照说明书，严格操作。温度一定要把握准确，问题不大。
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8楼2012-03-20 16:20:49
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zhixuec

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-03-21 08:04:42
我用的是TATARA的内切酶

这两种酶切效果还是可以的，我们一般用37℃水浴4h ，效果超好

后面做连接转化效率贼高~！
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酷爱の族
9楼2012-03-20 18:38:55
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lqs075

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by rommel1941 at 2012-03-20 09:04:10:
建议去NEB的主页，有专门的双酶切软件http://www.neb-china.com/
祝好

谢谢你的建议！不过貌似NEB的这两种酶不能同时用的耶
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10楼2012-04-22 00:19:53
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