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lqs075

银虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切

最近在做双酶切,用的是EcoR 1和Hind 3,请问要怎样才能得到比较好的结果呢?我同时加两种酶和它们相对应的buffer 进去的话,会不会相互影响呢?求各位大师指点
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果使用的是TAKARA的酶,在酶切体系中加1XM就可以了!
相信自己,一定能成功!
2楼2012-03-19 22:08:47
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lqs075

银虫 (初入文坛)

可以再说得明白些吗?
3楼2012-03-19 22:57:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-03-20 12:05:58
楼主用的是哪家的酶?试剂公司对于双酶切一般都有推荐使用的缓冲液。譬如NEB的EcoR 1-HF和Hind 3-HF用buffer 4。对于TAKARA的用1XM (见http://www.takara.com.cn/?action ... d=69&subclass=1)。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-03-19 23:16:00
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-20 12:06:18
lqs075: 金币+2, 有帮助, 好,我去下一个看看 2012-03-20 21:08:06
我推荐过一款专门进行双酶切设计的在线软件,Double digestion designer,,可以自动推荐buffer,还可以精确计算酶切所需的酶量,对新手来说,很方便,你可以试试。http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php
5楼2012-03-20 08:22:16
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

建议去NEB的主页,有专门的双酶切软件http://www.neb-china.com/
祝好
将相本无种★男儿当自强
6楼2012-03-20 09:04:10
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王雨云

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励~ 2012-03-20 12:06:32
Double digestion designer我也用过,两种酶的通用buffer上面有介绍,每种酶在这种buffer里的剩余酶活页也会显示。
7楼2012-03-20 11:22:19
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jiafeimao21

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这2个酶我用过的,可以一起用。

按照说明书,严格操作。温度一定要把握准确,问题不大。
8楼2012-03-20 16:20:49
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zhixuec

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-03-21 08:04:42
我用的是TATARA的内切酶

这两种酶切效果还是可以的,我们一般用37℃水浴4h ,效果超好

后面做连接转化效率贼高~!
酷爱の族
9楼2012-03-20 18:38:55
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lqs075

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rommel1941 at 2012-03-20 09:04:10:
建议去NEB的主页,有专门的双酶切软件http://www.neb-china.com/
祝好

谢谢你的建议!不过貌似NEB的这两种酶不能同时用的耶
10楼2012-04-22 00:19:53
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