【答案】应助回帖

31楼2014-06-22 21:55:33

鬼羽帝魂

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24楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-06-21 23:43:18
如果质粒加的太多的话，电泳结果应该能显示出两条带啊，一条切开的，一条没切开的。总不会因为加的质粒太对就让酶失活了吧...

切下来的片段有多大呀

32楼2014-06-23 22:12:11

a50044758

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【答案】应助回帖

★
seven拂晓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-25 13:32:18

NOT1还蛮好切的，你换个带NOT1的质粒切得看看，如果还是切不开那可能你的酶有问题，我以前遇到过这样的情况。

33楼2014-06-24 09:58:15

seven拂晓

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32楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-23 22:12:11
切下来的片段有多大呀...

750bp

34楼2014-06-25 12:09:19

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34楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-06-25 12:09:19
750bp

这个不太好看啊有点小可以试着低电压高浓度胶时间20min看看有没有750的带

35楼2014-06-25 14:54:39

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35楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-25 14:54:39
这个不太好看啊有点小可以试着低电压高浓度胶时间20min看看有没有750的带...

我的片段和载体用同样的温度时间切片段是可以切开的载体就切不开

36楼2014-06-27 08:58:13

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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 15:23:19

1.“在一号管中加入酶切体系和NOTI酶，37度7个小时，电泳检测，发现酶切后的带和未酶切的带大小相同。说明酶切不成功。”

你的载体上只有一个NotI的酶切位点，搜易应该是线性化的，只有一条带，你提的质粒应该有2-3条带，如果切了以后只有一条带，就说明已经切开了。

2.“在二号管中加入酶切体系和sfiI酶，50度过夜。电泳检测，酶切后的带比未酶切的带迁移的慢，说明已经成功切开了。”
其实看酶切有没有完全的时候，这样做不太好。最好是比较提的质粒有2-3条带，酶切后的有1条带比较好。
一般提质粒都有2-3条带的，试剂盒提质粒的话就不好说了，试剂盒提出来好像是一条带。

37楼2014-06-27 10:40:20