应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切总是切不开。。。有没有人用过NEB的NotI这个酶？
汕头大学海洋科学接受调剂
373/4返回列表上一页1234下一页
查看: 7393  |  回复: 36
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dongqin725

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓: 金币+5 2014-06-22 21:53:11
DoubleDigestionDesigner试试这个

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
21楼2014-06-21 18:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 雨雨催化剂 at 2014-06-21 09:02:07
Not1应该先构建在T载体上面，不然酶切效率非常低

恩恩 我就是先连的T载体 现在从T载体上切下来与其他的载体连的
赞一下 回复此楼
22楼2014-06-21 23:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 曾文正公 at 2014-06-21 11:37:06
你用的是notI还是NotI-HF  前者的话他们的buffer是不一样的  后者的话buffer倒是一样  不过我的经验是如果双酶切出了问题  用分开切一般就都解决了  仅供参考...

用的是not1-hf
你的意思是先用not1切，然后pcr回收，再用sfi切？
先用not1还是先用sfi有区别吗
赞一下 回复此楼
23楼2014-06-21 23:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-06-21 16:11:53
我感觉你的质粒加多了。   说明书里的都是1ug质粒用0.5ul的酶。
你加30ul，起码得有4ug以上。...

如果质粒加的太多的话，电泳结果应该能显示出两条带啊，一条切开的，一条没切开的。总不会因为加的质粒太对就让酶失活了吧
赞一下 回复此楼
24楼2014-06-21 23:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seven拂晓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-22 12:35:33
seven拂晓: 金币+10 2014-06-22 21:31:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-06-20 21:52:18
那应该以什么标准来判断呢 1ul的酶切多少ul的载体呢...

看一微升是多少u，1u代表可以在一小时内切开一微克质粒的酶量。我以前也用你这个思路，费东西且低效。建议你用20微升体系加1到2微升的质粒（>100ng/μl），加0.5μl酶，肯定能切开且够用。
赞一下 回复此楼
25楼2014-06-22 01:21:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曾文正公

金虫 (著名写手)
★
seven拂晓(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-22 12:35:43
引用回帖:
23楼: Originally posted by seven拂晓 at 2014-06-21 23:36:02
用的是not1-hf
你的意思是先用not1切，然后pcr回收，再用sfi切？
先用not1还是先用sfi有区别吗...

都可以的  不过建议先用sfiI切  因为你质粒加的很多 而根据你之前的实验 这个酶不太可能有问题  然后再用notI切回收的产物(回收产物的量少)  这样更能消除不确定因素
赞一下(1人) 回复此楼
只有非常努力，才能看起来毫不费力
26楼2014-06-22 12:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-15 15:22:54
NotI，好切啊。请您仔细阅读使用说明。另外，看看它们是否有连接酶活性，切开后可能连回去了。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
27楼2014-06-22 13:16:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
你是个新手吧。做酶切，没什么技术含量，只要注意操作，按说明就是。至于分别单切，只要buffer和酶活性考虑周全就是。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
28楼2014-06-22 13:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
注意酶是否失活！

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
29楼2014-06-22 13:20:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven拂晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 曾文正公 at 2014-06-22 12:09:33
都可以的  不过建议先用sfiI切  因为你质粒加的很多 而根据你之前的实验 这个酶不太可能有问题  然后再用notI切回收的产物(回收产物的量少)  这样更能消除不确定因素...

好 我这样做一下试试，十分感谢你呀
ps我很认同你的签名
赞一下 回复此楼
30楼2014-06-22 21:26:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 seven拂晓 的主题更新
373/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +11 月@163.com 2026-04-11 11/550 2026-04-13 22:52 by pies112
[考研] 290求调剂 +16 luoziheng 2026-04-10 16/800 2026-04-13 20:34 by biomen
[教师之家] 转长聘了 +3 简单化xn 2026-04-13 3/150 2026-04-13 14:18 by wwwkkk83
[考研] 335求调剂 +18 想上岸呀！！ 2026-04-12 19/950 2026-04-13 14:15 by 张zhihao
[材料工程] 材料调剂推荐 +9 蛋糕x2 2026-04-07 9/450 2026-04-13 09:07 by lhj2009
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +12 emokidd 2026-04-08 13/650 2026-04-13 08:32 by lhj2009
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 316求调剂 +5 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 5/250 2026-04-12 00:43 by 蓝云思雨
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 材料专业344求调剂 +16 hualkop 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 17:28 by laoshidan
[考研] 0703化学求调剂 +21 不知名的小卅 2026-04-08 21/1050 2026-04-09 18:55 by l_paradox
[考研] 生物学学硕，初试351分，求调剂 +4 …～、王…～ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭