24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2362  |  回复: 9

070250035

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么单酶切切不开

最近最转基因用的Super1300载体,选HindIII和Spe1 酶双酶切后和目的片段连接,但是总是空载,自连,没办法,单酶切验证发现Spe1酶切不开,HindIII没问题,可以确定不是酶的问题,因为用别人切其他质粒没问题的Spe1酶切的,但是切我的空载都不行,另外想着换 酶切位点,拿其他酶试了一下,也能切开,但是SpeI就是切不开,和空载的条带一样!一直弄不明白怎么回事,我用的NEB酶,看NEB目录说这个酶对甲基化并不敏感啊,怎么回事啊???谁能救救我!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

探究知识的海洋
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2013-04-11 17:21:33
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系,质粒加了多少?一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。
2楼2013-04-10 14:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tayifeita

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
载体上面那个位点是不是被甲基化了?或者是缓冲液有问题?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-04-10 20:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-10 14:53:16
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系,质粒加了多少?一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。

40微升体系加了5微升质粒,酶加1.5微升,切不开啊,我用试剂盒提的质粒,应该没问题吧???是Spe1酶有什么特殊的么??
探究知识的海洋
4楼2013-04-11 09:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tayifeita at 2013-04-10 20:07:18
载体上面那个位点是不是被甲基化了?或者是缓冲液有问题?

缓冲液是通用的,其他酶都问题,但是这个Spe1看NEB上说并不对甲基化敏感啊?
探究知识的海洋
5楼2013-04-11 09:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 070250035 at 2013-04-11 09:42:08
40微升体系加了5微升质粒,酶加1.5微升,切不开啊,我用试剂盒提的质粒,应该没问题吧???是Spe1酶有什么特殊的么??...

确定质粒序列没有问题吗?会不会是突变了。
6楼2013-04-11 13:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangwang2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该从Super1300找原因了,可能酶切位点出问题了。
7楼2013-04-11 19:26:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangwang2 at 2013-04-11 19:26:13
应该从Super1300找原因了,可能酶切位点出问题了。

换了载体果然成功了!
探究知识的海洋
8楼2013-04-21 16:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2298827423

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 070250035 at 2013-04-21 16:40:48
换了载体果然成功了!...

您是换了一管新的SP1300吗?我的为何换了几管都还是切不开?求回复,谢谢
9楼2016-08-14 17:34:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingh119

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

10楼2016-08-14 18:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 070250035 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 086000生物与医药求调剂 +3 老天眷顾之人 2026-03-31 3/150 2026-04-05 22:24 by syh9288
[考研] 277求调剂 +6 瓶子PZ 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:38 by 啵啵啵0119
[考研] 282求调剂 +3 aaa车辆 2026-04-01 3/150 2026-04-05 17:03 by yulian1987
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业083200 +4 what张 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:07 by chw1980_0
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 290求调剂085701 +10 1314捧花 2026-04-02 10/500 2026-04-05 10:19 by Sealedwind
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-03-31 5/250 2026-04-04 19:45 by 1753564080
[考研] 学硕288调剂!!! +3 小王xw123 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:20 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 土木水利328分求调剂 +6 疾风知劲草666 2026-04-02 6/300 2026-04-03 11:38 by znian
[考研] 279求调剂 +6 qazplm0852 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:03 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂!生物与医药专硕 +4 逆转陆先生 2026-04-01 5/250 2026-04-03 08:33 by Jaylen.
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
信息提示
请填处理意见