应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 为什么单酶切切不开
51/1返回列表
查看: 2756  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

070250035

银虫 (小有名气)

[求助] 为什么单酶切切不开

最近最转基因用的Super1300载体，选HindIII和Spe1 酶双酶切后和目的片段连接，但是总是空载，自连，没办法，单酶切验证发现Spe1酶切不开，HindIII没问题，可以确定不是酶的问题，因为用别人切其他质粒没问题的Spe1酶切的，但是切我的空载都不行，另外想着换 酶切位点，拿其他酶试了一下，也能切开，但是SpeI就是切不开，和空载的条带一样！一直弄不明白怎么回事，我用的NEB酶，看NEB目录说这个酶对甲基化并不敏感啊，怎么回事啊？？？谁能救救我！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
探究知识的海洋
1楼 2013-04-10 10:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-10 14:53:16
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系，质粒加了多少？一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。

40微升体系加了5微升质粒，酶加1.5微升，切不开啊，我用试剂盒提的质粒，应该没问题吧？？？是Spe1酶有什么特殊的么？？
赞一下 回复此楼
探究知识的海洋
4楼2013-04-11 09:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-04-11 17:21:33
有些酶对盐浓度比较敏感。一般提的质粒里可能会有一定盐分。你用的多少μl的酶切体系，质粒加了多少？一般可以扩大酶切体系的体积可以解决问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-10 14:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tayifeita

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体上面那个位点是不是被甲基化了？或者是缓冲液有问题？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-10 20:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tayifeita at 2013-04-10 20:07:18
载体上面那个位点是不是被甲基化了？或者是缓冲液有问题？

缓冲液是通用的，其他酶都问题，但是这个Spe1看NEB上说并不对甲基化敏感啊？
赞一下 回复此楼
探究知识的海洋
5楼2013-04-11 09:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭